Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-PARP Clivado (Asp214) - Q921K2

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Poli [ADP-ribose] Polimerase

• Enzima chave de reparo de DNA: A PARP1 media a poli-ADP-ribosilação (PARilação) de proteínas alvo em resposta a danos no DNA, recrutando a maquinaria de reparo para quebras de fita simples.
• Marcador de apoptose: Durante a apoptose, a caspase-3 e a caspase-7 clivam a PARP1 de comprimento total (113 kDa) em Asp214, gerando um fragmento de 89 kDa que se liga irreversivelmente a quebras de DNA e bloqueia o reparo, promovendo a morte celular programada.
• Apoptose mediada por AIFM1: O fragmento clivado sofre auto-PARilação e atua como um carreador de poli-ADP-ribose, desencadeando a translocação da AIFM1 das mitocôndrias para o núcleo para induzir fragmentação de DNA em larga escala.
• Distribuição subcelular: Localiza-se principalmente no núcleo (nucleoplasma e nucléolo) e associa-se à cromatina; após a clivagem, o fragmento transloca para o citosol.
• Domínios funcionais: Contém motivos de dedo de zinco para ligação ao DNA, um domínio de automodificação e um domínio catalítico C-terminal que usa NAD+ como substrato.
• Família gênica: Pertence à superfamília PARP; Parp1 (Adprt1) é o membro fundador. Também é conhecida como ADPRT, ARTD1 e PPOL.
• Modificações pós-traducionais: Extensa auto-poli-ADP-ribosilação modula sua própria atividade e serve como um andaime para outros fatores de reparo. A clivagem por caspases é um evento regulatório chave.
• Palavras-chave: ADP-ribosilação, enzima alostérica, apoptose, cromossomo, citoplasma, dano no DNA, reparo de DNA, ligação ao DNA, glicosiltransferase, imunidade, imunidade inata, ligação isopeptídica, ligação a metal, NAD, nucleotidiltransferase, núcleo, identificação proteômica, repetição, transcrição, regulação da transcrição, transferase, zinco, dedo de zinco.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os resíduos 201-300 da PARP1 de camundongo, que inclui o sítio de clivagem da caspase-3/7 em Asp214. Este desenho permite o reconhecimento específico da forma clivada em experimentos de apoptose.
• Para Western blotting (WB), use lisados de células ou tecidos de camundongo tratados com indutores de apoptose (por exemplo, estaurosporina, etoposídeo) para melhorar o sinal. A proteína de comprimento total corre a ~113 kDa, enquanto o fragmento clivado aparece a ~89 kDa.
• Para ELISA, considere usar o anticorpo como reagente de captura ou detecção em ensaios sanduíche; o pareamento com um anticorpo pan-PARP permite diferenciar PARP clivada vs. total.
• Valide a especificidade do anticorpo usando linhagens celulares com nocaute para PARP1 ou controles com inibidor de caspase para confirmar que a banda detectada desaparece em condições não apoptóticas.
• Evite ciclos repetidos de congelamento e descongelamento para manter a integridade do anticorpo; o armazenamento de curto prazo a 4°C é aceitável, mas o armazenamento de longo prazo é recomendado a -20°C ou abaixo.

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