Anticorpo policlonal de coelho anti-CTCF para WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA, ChIP - P49711

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do CTCF

• CTCF (repressor transcricional CTCF), também denominado proteína de 11 dedos de zinco e fator de ligação CCCTC, é um fator de ligação à cromatina expresso ubiquamente, ausente nos espermatócitos primários.
• Ele se liga a sequências específicas de DNA e regula a arquitetura tridimensional da cromatina por meio da formação de alças e da ancoragem do DNA à lâmina nuclear, organizando assim o genoma.
  Referências relacionadas: PMID:16949368, PMID:18347100, PMID:18654629, PMID:19322193
• O CTCF define limites entre o DNA ativo e o DNA heterocromático ao se ligar a isoladores de cromatina, bloqueando assim interações inadequadas entre intensificadores e promotores.
  Referências relacionadas: PMID:18347100, PMID:18654629, PMID:19322193
• Ele desempenha um papel crítico na expressão específica de alelos no locus gênico impresso IGF2/H19, onde a ligação ao alelo materno estabelece uma conformação da cromatina que restringe o acesso do intensificador ao IGF2.
  Referências relacionadas: PMID:16107875, PMID:16815976, PMID:17827499
• O CTCF liga-se preferencialmente ao DNA não metilado, ajudando a manter zonas livres de metilação, enquanto sua ligação é impedida pela metilação de CpG.
  Referências relacionadas: PMID:18413740
• Ele atua como um regulador transcricional duplo, reprimindo MYC e BAG1 e ativando o gene APP.
  Referências relacionadas: PMID:8649389, PMID:9591631, PMID:9407128
• O CTCF está envolvido na coesão das cromátides-irmãs e localiza-se nos centrômeros durante a mitose, onde recruta CENPE para as regiões pericentroméricas.
  Referências relacionadas: PMID:12191639, PMID:18550811, PMID:26321640
• É considerado um supressor tumoral e é essencial para o desenvolvimento embrionário inicial, regulando a transcrição em oócitos e embriões pré-implantação.
  Referências relacionadas: PMID:12191639

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno abrange a região N-terminal (aminoácidos 1–260) do CTCF humano, o que pode aumentar a acessibilidade à proteína nativa em ensaios de imunoprecipitação da cromatina (ChIP).
• Para Western blotting, espera-se uma banda predominante correspondente ao peso molecular calculado de aproximadamente 83 kDa; no entanto, modificações pós-traducionais podem resultar em bandas adicionais. Recomendamos validar o tamanho e a especificidade no sistema de amostra relevante.
• Considerando a reatividade cruzada relatada com humanos, camundongos e ratos, os usuários devem confirmar o desempenho do anticorpo na espécie e no tipo de tecido específicos, pois os níveis de expressão podem variar.
• Na imunofluorescência, o CTCF apresenta localização nuclear, com possível enriquecimento nos centrômeros; as condições apropriadas de fixação e permeabilização devem ser otimizadas para cada linhagem celular.
• Ao utilizar este anticorpo policlonal para IP ou ELISA, considere incluir controles de isotipo apropriados e testar uma faixa de diluições do anticorpo devido à variabilidade entre lotes.

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