pAb de coelho DiMethyl-Histona H3-K14 (Q16695/P68431) para WB, IF/ICC, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A Histona H3 é um componente central do nucleossomo, a unidade fundamental de repetição da cromatina. Os nucleossomos enrolam e compactam o DNA, limitando assim a acessibilidade do DNA aos mecanismos celulares que precisam do DNA como molde. As histonas desempenham um papel central na regulação da transcrição, reparo do DNA, replicação do DNA e estabilidade cromossômica. A acessibilidade do DNA é regulada por um conjunto complexo de modificações pós-traducionais (o "código das histonas") e remodelação de nucleossomos.

Este anticorpo reconhece a forma dimetilada da lisina 14 (K14) na histona H3 humana. Duas isoformas principais são representadas pelos acessos SWISS Q16695 (Histona H3.1t, expressa em células testiculares) e P68431 (Histona H3.1, uma variante canônica). Ambas as isoformas se localizam no núcleo e nos cromossomos.

A lisina 14 é um resíduo crítico dentro da cauda N-terminal da histona H3 que sofre modificações pós-traducionais dinâmicas, incluindo acetilação e metilação, que influenciam a estrutura da cromatina e a expressão gênica. A dimetilação de K14 está associada a resultados transcricionais específicos e faz parte da paisagem regulatória epigenética mais ampla.

Referências relacionadas: A função central do nucleossomo é suportada por numerosos estudos estruturais e bioquímicos. Para insights específicos sobre a modificação, consulte: PMID:19608861, PMID:17194708.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunogênio é um peptídeo dimetilado sintético ao redor de K14. Para garantir a especificidade pela forma dimetilada, considere validar o anticorpo contra o peptídeo K14 não modificado ou peptídeos com mono-/trimetilação em K14.
• Para Western blotting, uma diluição inicial pode ser otimizada usando frações de extrato nuclear; a banda esperada é de ~15 kDa. Confirme o desaparecimento da banda em amostras tratadas com K14 demetilase, se disponível.
• Em imunofluorescência (IF/ICC), as condições de fixação e permeabilização podem impactar a acessibilidade do epítopo. É recomendável testar a fixação com metanol versus formaldeído e incluir um controle de competição com peptídeo.
• Para ELISA, use o peptídeo imunogênio como controle positivo e um peptídeo K14 não modificado como controle negativo para verificar a ligação específica à modificação.
• Prevê-se que o anticorpo apresente reatividade cruzada com uma ampla gama de espécies devido à conservação da sequência da cauda N-terminal da histona H3. Valide na espécie de interesse usando controles positivos e negativos apropriados.

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