Anticorpo Policlonal de Coelho DiMetil-Histona H3-K27 (Q16695/P68431) para Pesquisa Epigenética e ChIP

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A histona H3 é um componente central do nucleossomo, a unidade fundamental da cromatina. Os nucleossomos envolvem e compactam o DNA, limitando o acesso à maquinaria celular e, assim, desempenhando um papel central na regulação da transcrição, reparo do DNA, replicação do DNA e estabilidade cromossômica.

A histona H3 está sujeita a uma vasta gama de modificações pós-traducionais (PTMs), incluindo acetilação, metilação, fosforilação, citrulinização e muitas outras, coletivamente referidas como "código das histonas". Essas modificações regulam dinamicamente a estrutura da cromatina e a expressão gênica. A cauda N-terminal da histona H3 é particularmente rica em resíduos modificáveis, sendo a lisina 27 (K27) um sítio crítico para eventos de metilação. A di-metilação da H3K27 (H3K27me2) está associada à repressão transcricional e manutenção da heterocromatina.

O genoma humano codifica várias variantes da histona H3. Q16695 (H3-4, também conhecida como H3.1t) é uma histona específica do testículo expressa principalmente em células testiculares, enquanto P68431 (H3C1/H3C2/H3C3/H3C4/H3C6/H3C7/H3C8/H3C10/H3C11/H3C12) representa as variantes canônicas H3.1 dependentes de replicação expressas em células somáticas. Ambas as variantes são altamente conservadas e compartilham sequências N-terminais idênticas onde o K27 está localizado. Elas se localizam exclusivamente no núcleo e cromossomos, onde formam uma parte integral das fibras de cromatina.

Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Orientacão Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blot (WB), é esperada uma única banda em torno de 15 kDa correspondente à histona H3. Use controles positivos e negativos apropriados para confirmar a identidade da banda e a especificidade da di-metilação.
• Para ChIP e ChIP-seq, otimize as condições de reticulação (por exemplo, formaldeído) e de cisalhamento da cromatina. Considere validar o enriquecimento de loci alvo conhecidos de H3K27me2 usando qPCR ou sequenciamento paralelo.
• O anticorpo tem reatividade cruzada com humano, camundongo e rato, e prevê-se que tenha uma ampla gama de reatividade. No entanto, é aconselhável validar o desempenho na espécie e tecido específicos de interesse antes de experimentos em larga escala.
• Para ELISA e dot blot (DB), faça titulação do anticorpo e inclua etapas de bloqueio para minimizar a ligação inespecífica; o peptídeo imunogênico pode servir como controle positivo.
• Em imuno-histoquímica (IHC) e imunofluorescência (IF/ICC), observe que a histona H3 é nuclear; uma contracoloração (por exemplo, DAPI) pode ajudar a visualizar a localização nuclear. Recuperação antigênica pode ser necessária.

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