Anticorpo Policlonal de Coelho DiMethyl-Histona H3-K36 (Q16695 / P68431) para WB, IHC-P, IF/ICC, ChIP-seq

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

• A histona H3 é um componente central do nucleossomo, envolvendo e compactando o DNA em cromatina. Isso limita a acessibilidade do DNA às maquinarias celulares e, portanto, desempenha um papel central na regulação da transcrição, reparo do DNA, replicação do DNA e estabilidade cromossômica. A acessibilidade do DNA é regulada por meio de um conjunto complexo de modificações pós-traducionais, conhecidas coletivamente como código de histonas, e remodelagem de nucleossomos.
• A histona canônica H3.1 (UniProt P68431) é codificada por múltiplos genes dependentes de replicação (H3C1, H3C2, H3C3, H3C4, H3C6, H3C7, H3C8, H3C10, H3C11, H3C12). A variante H3.1t (UniProt Q16695, gene H3-4), também conhecida como H3t ou H3/g, é expressa em células testiculares.
• A dimetilação da Lisina36 (numeração convencional; corresponde à Lisina37 na sequência precursora) é uma modificação pós-traducional específica na cauda N-terminal da histona H3. Esta modificação contribui para o código de histonas e está implicada no alongamento transcricional e manutenção da integridade do genoma. Referências relacionadas:
  • PMID:15983376
  • PMID:16185088
  • PMID:16267050
  • PMID:16627869
  • PMID:17194708
• Tanto a histona H3.1 quanto a H3.1t se localizam no núcleo e no cromossomo, consistentes com seus papéis na estrutura e função da cromatina.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno era um peptídeo sintético contendo a Lisina36 dimetilada da histona H3 humana, projetado para conferir alta especificidade para esta modificação. Para aplicações críticas, considere verificar a especificidade por ensaios de competição de peptídeos ou análise de Western blot de extratos de histonas com estados de metilação conhecidos.
• No Western blot (WB), espera-se uma banda em aproximadamente 15 kDa. Otimize a diluição do anticorpo e valide no sistema de amostra relevante, usando controles de carregamento apropriados.
• Para imunoprecipitação de cromatina (ChIP e ChIP-seq), confirme o enriquecimento de H3K36 dimetilada nos corpos gênicos ativamente transcritos ou outros alvos genômicos estabelecidos. Inclua loci de controle positivo e negativo adequados para garantir o desempenho de grau ChIP.
• Em imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), os métodos de fixação e recuperação de antígeno podem afetar a acessibilidade do epítopo; considere testar diferentes condições para obter o sinal ideal.

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