Anticorpo Policlonal de Coelho DiMetil-Histona H3-K4 (Q16695/P68431) para WB, ChIP, ChIP-seq, IHC-P

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3.1t/Histona H3.1

A histona H3 é um componente central do nucleossomo, a unidade fundamental repetitiva da cromatina. Junto com as histonas H2A, H2B e H4, ela forma um octâmero ao redor do qual 147 pares de bases de DNA são enrolados, compactando o genoma e regulando a acessibilidade do DNA. Esta estrutura é essencial para processos modelados no DNA, incluindo transcrição, replicação, reparo e estabilidade cromossômica.

A variante canônica da histona H3.1 é codificada por múltiplos genes (por exemplo, HIST1H3A a HIST1H3J) e é depositada no DNA recém-replicado durante a fase S. Em contraste, o isoforma H3.1t (gene H3-4 / HIST3H3) é uma variante específica dos testículos, expressa principalmente em células testiculares e potencialmente envolvida na remodelagem da cromatina durante a espermatogênese.

A histona H3 sofre extensas modificações pós-traducionais (PTMs) em sua cauda N-terminal flexível, formando um complexo regulatório de "código de histonas". PTMs conhecidas incluem metilação, acetilação, fosforilação, ADP-ribosilação, ubiquitinação e outras. A metilação da lisina 4 (H3K4) é uma marca chave: a dimetilação (H3K4me2) está associada a elementos reguladores de genes ativos e preparados, como promotores e intensificadores.

Este anticorpo foi gerado contra um peptídeo sintético correspondente à cauda N-terminal (aminoácidos 1-100) da histona H3 humana, uma região que inclui o resíduo K4 e é altamente conservada entre espécies. O anticorpo reconhece especificamente a forma dimetilada de K4.

A histona H3 localiza-se no núcleo e é um componente estrutural dos cromossomos.

Referências relacionadas: PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:24681537

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange a cauda N-terminal da histona H3, garantindo o reconhecimento da região contendo o resíduo K4. Para detecção específica de metilação, valide com ensaios de bloqueio de peptídeo apropriados ou controles de histona mutante.
• Para "Western blotting" (WB), podem ser usados extratos enriquecidos em histonas ou lisados celulares totais. A banda esperada é de aproximadamente 15 kDa. Considere o uso de uma membrana de transferência de alta qualidade e bloqueio estendido para minimizar o fundo.
• Na imunoprecipitação de cromatina (ChIP) e ChIP-seq, este anticorpo pode ser adequado para mapear a distribuição de H3K4me2. Inclua loci de controle positivo (por exemplo, promotores ativos) e loci de controle negativo (por exemplo, regiões intergênicas) para avaliar a especificidade. Ao realizar ChIP-seq, a preparação da biblioteca e a profundidade do sequenciamento devem ser otimizadas de acordo com o desenho experimental específico.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), a recuperação de antígeno (por exemplo, tampão citrato mediado por calor pH 6,0) e a permeabilização podem melhorar a detecção. Teste diferentes métodos de fixação (por exemplo, formol vs. metanol), pois eles podem afetar a disponibilidade do epítopo.
• O anticorpo mostra reatividade cruzada prevista com humano, camundongo, rato e outras espécies devido à alta conservação da sequência da extremidade N da H3. Se usar uma nova espécie, considere o alinhamento de sequências para confirmar a conservação do epítopo e realize um experimento de controle positivo.
• Anticorpos específicos para metilação podem exibir reatividade cruzada com outras marcas de metil-lisina. Para confirmar a especificidade, inclua experimentos de bloqueio competitivo de peptídeo usando dimetil-K4 e outros peptídeos modificados.
• As diluições ideais devem ser determinadas empiricamente para cada ensaio.

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