Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-DiMetil-Histona H3-K79 (Q16695/P68431) – Validado para WB, IHC-P, ChIP-seq

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

• A histona H3 é um componente central do nucleossomo, essencial para enrolar e compactar o DNA em cromatina. Esta organização estrutural regula a acessibilidade do DNA e desempenha um papel central na transcrição, reparo de DNA, replicação e estabilidade cromossômica. Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

• A histona H3 existe em múltiplas variantes. A histona H3.1 canônica (codificada por genes como H3C1–H3C12) é expressa de forma ubíqua, enquanto a variante específica de testículo H3.1t (H3-4) é expressa principalmente em células testiculares. Ambas compartilham alta similaridade de sequência, incluindo o resíduo K79 conservado. Referências relacionadas: UniProt Q16695 (especificidade de tecido), UniProt P68431

• Modificações pós-traducionais (MPTs) na histona H3, como metilação, acetilação, fosforilação e outras, constituem o "código de histonas" que governa a dinâmica da cromatina. A lisina 79 (K79) é um sítio notável para metilação (mono-, di- e trimetilação), com a dimetilação (H3K79me2) implicada na regulação transcricional, reparo de DNA e silenciamento telomérico. Referências relacionadas: Para modificações relacionadas, consulte PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:16457588

• Este anticorpo foi produzido contra um peptídeo sintético contendo K79 dimetilado. Ele foi projetado para detectar especificamente o estado de dimetilação da histona H3 em K79, com ampla reatividade prevista em muitas espécies devido à conservação da sequência. Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

• Localização subcelular: A histona H3 está localizada principalmente no núcleo e nos cromossomos, onde forma parte do núcleo do nucleossomo. Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Desenho do imunógeno: O anticorpo foi gerado usando um peptídeo sintético contendo K79 dimetilado da histona H3 humana (NP_003520.1). Para anticorpos específicos de modificação semelhantes, considere o uso de peptídeos sintéticos com modificações definidas para garantir alta especificidade.
• Western blotting (WB): A histona H3 tem um peso molecular previsto de ~15 kDa. Para melhores resultados, use histonas extraídas com ácido ou lisados celulares totais, e otimize a porcentagem do gel e as condições de transferência para proteínas de baixo peso molecular. Valide em seu sistema de amostra.
• Imunohistoquímica (IHC-P) e Imunofluorescência (IF/ICC): A recuperação de antígeno (por exemplo, tampão citrato) pode ser necessária. Teste uma faixa de diluições do anticorpo; observe que a fixação e inclusão do tecido podem afetar a acessibilidade do epítopo.
• Imunoprecipitação da Cromatina (ChIP/ChIP-seq): Este anticorpo está listado para aplicações de ChIP e ChIP-seq. Garanta uma reticulação adequada (por exemplo, formaldeído) e fragmentação da cromatina para fragmentos de ~200–500 pb. Inclua controles positivos e negativos apropriados para o estado de metilação.
• ELISA e IP: Protocolos padrão são aplicáveis. Para IP, o pré-lavagem e o uso de tampões de lise apropriados (por exemplo, RIPA para extração de histonas) podem melhorar a relação sinal-ruído.
• Reatividade cruzada: O anticorpo reconhece a histona H3 humana, de camundongo e rato, com uma ampla gama de espécies adicionais prevista com base na homologia de sequência. Sempre verifique a reatividade cruzada em sua espécie alvo.
• Geral: Como com qualquer anticorpo policlonal, considere a variabilidade entre lotes e revalide ao trocar de lote. Armazene conforme recomendado (enviado em saco de gelo) e evite múltiplos ciclos de congelamento e descongelamento.

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