DNMT1 Coelho pAb para WB, IF/ICC, IP, ELISA - P26358

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da DNMT1

• DNMT1 (DNA (citosina-5)-metiltransferase 1) é a principal metiltransferase de manutenção que copia os padrões de metilação do DNA para a fita recém-sintetizada durante a replicação do DNA, garantindo a herança epigenética (PubMed:17200670, PubMed:21745816). Referências relacionadas: PMID:17200670, PMID:21745816

• A DNMT1 metila preferencialmente dinucleotídeos CpG hemi-metilados e é essencial para a propagação fiel dos padrões de metilação durante a divisão celular (PubMed:21745816, PubMed:26070743). Referências relacionadas: PMID:21745816, PMID:26070743

• Além da manutenção acoplada à replicação, a DNMT1 associa-se à cromatina durante as fases G2 e M para sustentar a metilação do DNA independentemente da replicação (PubMed:21745816). Referências relacionadas: PMID:21745816

• A DNMT1 media a repressão transcricional diretamente através da interação com a HDAC2 e coordena a metilação do DNA com modificações de histonas (PubMed:10888872, PubMed:16357870). Referências relacionadas: PMID:10888872, PMID:16357870

• Em células de câncer colorretal, a DNMT1 forma um complexo co-repressor que media a hipermetilação do promotor dirigida por KRAS oncogênica e o silenciamento de genes supressores de tumor (PubMed:24623306). Ela também mantém um estado transcricionalmente repressivo de genes em células-tronco embrionárias indiferenciadas (PubMed:24623306). Referências relacionadas: PMID:24623306

• A DNMT1 é expressa de forma ubíqua, com níveis mais altos em tecidos fetais, coração, rim, placenta e células mononucleares do sangue periférico, e níveis mais baixos em baço, pulmão, cérebro, intestino delgado, cólon, fígado e músculo esquelético. A isoforma 2 é menos abundante que a isoforma 1.

• A DNMT1 contém um domínio de dedo de zinco do tipo CXXC e sofre modificações pós-traducionais regulatórias, como acetilação, fosforilação e metilação.

• A DNMT1 localiza-se no núcleo e associa-se a cromossomos, consistente com seu papel na metilação de manutenção e na regulação transcricional.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange a região C-terminal (aa 760-1109) da DNMT1 humana, que engloba o domínio catalítico da metiltransferase; este projeto visa o sítio ativo e pode melhorar a detecção da DNMT1 de comprimento total.
• Para western blotting, espere uma banda em aproximadamente 183 kDa; usar um gel de SDS-PAGE de baixa porcentagem (por exemplo, 6–8%) e tempos de transferência prolongados pode ajudar a resolver esta proteína de alto peso molecular.
• Os níveis de expressão da DNMT1 variam entre tipos celulares e tecidos; valide o desempenho do anticorpo em seu sistema de amostra específico usando controles positivos (por exemplo, HeLa, HEK293) e negativos apropriados.
• Para imunoprecipitação, otimize a concentração do anticorpo e considere o cross-linking às contas para reduzir a interferência da cadeia pesada de IgG em ~50 kDa.
• Na imunofluorescência/ICC, a permeabilização nuclear (por exemplo, com Triton X-100) e uma fixação apropriada são necessárias para o acesso ao antígeno nuclear; a coloração conjunta com um marcador nuclear pode confirmar a localização.

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