EDA Rabbit pAb para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q92838

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Ectodisplasina-A (EDA)

• O gene EDA codifica a proteína transmembranar ectodisplasina-A, uma proteína de membrana do tipo II que pertence à família do fator de necrose tumoral (TNF). Ela pode ser clivada proteoliticamente para liberar um ectodomínio solúvel.
• A EDA atua como ligante para os receptores contendo domínio de morte EDAR e EDA2R, ativando vias de sinalização essenciais para as interações epiteliais-mesenquimais durante a morfogênese de órgãos ectodérmicos (PubMed:11039935, PubMed:27144394, PubMed:34582123). Referências relacionadas: PMID:11039935 PMID:27144394 PMID:34582123
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas com especificidades de receptor distintas: a isoforma 1 se liga exclusivamente ao EDAR, enquanto a isoforma 3 se liga exclusivamente ao EDA2R.
• Subcelularmente, a EDA é ancorada à membrana celular por meio de um domínio transmembranar N-terminal, mas também é secretada após clivagem em um par de resíduos básicos.
• A EDA é expressa em baixa abundância, predominantemente em células de origem ectodérmica, como queratinócitos, folículos pilosos e glândulas sudoríparas, e também é encontrada no coração, fígado, músculo, pâncreas e próstata adultos, e em tecidos fetais.
• Mutações no gene EDA estão ligadas à displasia ectodérmica hipoidrótica ligada ao X (XLHED), uma condição caracterizada pelo desenvolvimento defeituoso de dentes, cabelo e glândulas sudoríparas.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação e formação de pontes dissulfeto, que são críticas para o dobramento correto e a trimerização por meio do seu domínio semelhante ao colágeno.
• A EDA também pode participar da adesão celular, como sugerido por similaridades de sequência e estudos in vitro.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde a um segmento do ectodomínio da EDA (aminoácidos 62–182), que provavelmente está exposto na forma solúvel e pode gerar anticorpos que reconhecem tanto as isoformas de EDA ligadas à membrana quanto as secretadas.
• Para Western blot (WB), espera-se uma banda em torno de 41 kDa para a proteína de comprimento completo; isoformas clivadas ou alternativas podem produzir bandas adicionais. Inclua lisados de controle positivo adequados de tecidos humanos, de camundongo ou de rato conhecidos por expressarem EDA (ex.: queratinócitos, pele).
• Para imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), otimize a recuperação de antígeno e a diluição do anticorpo, pois a expressão da EDA é tipicamente baixa. Valide usando tecidos ricos em estruturas ectodérmicas, como pele ou folículos pilosos.
• Como anticorpo policlonal de coelho, a variabilidade entre lotes é possível; inclua uma amostra de controle padrão em cada ensaio para monitorar a consistência.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato sugere epítopos conservados; valide o anticorpo na espécie e no contexto de tecido relevante antes do uso extensivo.
• Para aplicações de ELISA, este anticorpo pode servir como reagente de captura ou detecção, mas o pareamento com um anticorpo monoclonal ou outro par validado é recomendado para ensaios sandwich.

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