Anticorpo Policlonal de Coelho EED para WB, IF, IP, ELISA - O75530

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do EED

• A proteína Polycomb EED (Proteína de desenvolvimento do ectoderma embrionário), também designada HEED, COGIS e WAIT-1, é um componente central do complexo repressor Polycomb 2 (PRC2). O splicing alternativo e o início alternativo geram múltiplas isoformas.
• Como parte do complexo PRC2/EED-EZH2, o EED metila a histona H3 na lisina-9 e lisina-27, levando ao silenciamento transcricional de genes alvo como HOXC8, HOXA9, MYT1 e CDKN2A.
• O EED reconhece a histona H1 trimetilada na lisina-26 (H1K26me3), o que inibe a atividade metiltransferase do PRC2 na H3K27 nucleossomal, enquanto o reconhecimento de H3K27me3 propaga a marca repressiva.
• O complexo PRC2/EED-EZH2 também pode recrutar DNA metiltransferases, estabelecendo uma ligação funcional entre a modificação de histonas e a metilação do DNA para a repressão gênica estável.
• O EED é localizado no núcleo e associa-se aos cromossomos, consistente com o seu papel na regulação da cromatina.
• Está sujeito a múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, fosforilação e metilação, que podem modular sua atividade e interações.
• O EED é amplamente expresso nos tecidos humanos, com níveis notavelmente elevados observados no câncer de mama e de cólon, apoiando o seu envolvimento na oncogênese.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os 400 aminoácidos terminais N do EED humano; esta região pode detectar a proteína de comprimento total e certas isoformas. Valide a detecção de quaisquer variantes de splicing específicas no seu sistema experimental.
• Para Western blotting (WB), o peso molecular previsto é de aproximadamente 50 kDa. Confirme o tamanho da banda com controles positivos e negativos apropriados.
• A reatividade cruzada é relatada para humano, camundongo e rato. Verifique a reatividade com outras espécies, se necessário, pelo alinhamento de sequência do imunógeno.
• Na imunofluorescência/ICC, realize fixação padrão (por exemplo, 4% PFA) e permeabilização (por exemplo, 0,1% Triton X-100). Coloração nuclear é esperada.
• Para imunoprecipitação (IP), use contas de Proteína A ou G e otimize a proporção anticorpo-lysato. Pré-limpe os lisatos para reduzir o ruído de fundo.
• A adequação para ELISA é indicada; titule o anticorpo e use a proteína EED recombinante ou peptídeo como antígeno de revestimento.
• Dada a superexpressão do EED em certos cânceres, inclua linhagens de células cancerosas relevantes (por exemplo, mama, cólon) como controles positivos.

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