eEF2 Rabbit mAb - P13639

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do eEF2

• Catalisa a etapa de translocação ribossomal dependente de GTP durante a elongação da tradução. Durante esta etapa, o ribossomo muda do estado pré-translocacional (PRE) para o pós-translocacional (POST) à medida que o peptidil-tRNA recém-formado ligado ao sítio A e o tRNA desacilado ligado ao sítio P se movem para os sítios P e E, respectivamente, acompanhado pelo movimento do mRNA e mudanças conformacionais no ribossomo. Referências relacionadas: PMID:26593721
• O eEF2 é uma proteína de ligação ao GTP altamente conservada de 95 kDa pertencente à família do fator de elongação-G, essencial para a biossíntese proteica.
• Localiza-se principalmente no citoplasma, onde exerce sua função canônica, mas também é detectado no núcleo, sugerindo papéis extratraducionais.
• Modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, ADP-ribosilação, metilação e conjugação tipo ubiquitina, regulam a atividade e estabilidade do eEF2 em resposta a sinais celulares.
• Mutações no gene EEF2 causam ataxia espinocerebelar tipo 26 (SCA26), um distúrbio neurodegenerativo caracterizado por incoordenação motora progressiva.
• Estudos estruturais revelam domínios de ligação de nucleotídeos conservados e conformações dinâmicas críticas para a ligação ao ribossomo e translocação.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno visa a região C-terminal (aa 759-858), o que pode facilitar a detecção do eEF2 de comprimento total e produtos de clivagem potenciais; verifique o tamanho da banda em aproximadamente 95 kDa em lisados representativos.
• Para Western blotting, use um gel SDS-PAGE padrão (por exemplo, 8-10%) e membrana de PVDF ou nitrocelulose; considere otimizar as condições de bloqueio (por exemplo, 5% de leite desnatado ou BSA) para reduzir o ruído de fundo.
• Em IHC-P e IF/ICC, a recuperação de antígeno (tampão citrato ou EDTA) e a permeabilização podem ser necessárias; teste protocolos de fixação (formalina vs. metanol) para equilibrar a preservação da morfologia e a acessibilidade do epítopo.
• O desempenho em ELISA depende do formato do ensaio; como um anticorpo monoclonal, pode servir como reagente de detecção ou captura; valide a linearidade e sensibilidade usando eEF2 recombinante ou lisados celulares.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato permite a pesquisa translacional em organismos modelo comuns; confirme a especificidade por knockdown de siRNA ou controles de nocaute em seu sistema experimental.

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