Anticorpo policlonal de coelho contra o receptor de EGF (específico para E746-A750del) para WB, ELISA - P00533

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do receptor de EGF (EGFR)

• O EGFR é um receptor tirosina-quinase que se liga a vários ligantes da família do EGF (por exemplo, EGF, TGFA, AREG, epigen, BTC, EREG, HBEGF). A ligação do ligante desencadeia homo- ou heterodimerização, autofosforilação e ativação de vias de sinalização a jusante, incluindo RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCgamma-PKC, STATs e NF-kappa-B. Este anticorpo é específico para o mutante com deleção E746-A750, comumente encontrado no câncer de pulmão de não pequenas células. Referências relacionadas: PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960 PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029 PMID:11116146 PMID:11602604 PMID:11483589 PMID:20462955
• A isoforma 2 do EGFR pode atuar como antagonista da ação do EGF, enquanto a isoforma canônica 1 é o receptor de sinalização predominante.
• O EGFR está localizado na membrana celular, mas também está presente no retículo endoplasmático, no aparelho de Golgi, no núcleo e nos endossomos, podendo ainda ser secretado.
• A proteína sofre extensas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, glicosilação, hidroxilação, palmitoilação, metilação e ubiquitinação, que regulam sua atividade e seu tráfego.
• É expressa ubiquamente, sendo a isoforma 2 encontrada adicionalmente em cânceres ovarianos.
• O EGFR também atua como receptor da célula hospedeira para a entrada do vírus da hepatite C (HCV), mediando a formação do complexo CD81-CLDN1 e a fusão de membranas.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno é uma proteína recombinante que abrange a deleção E746-A750, indicando que o anticorpo foi projetado para reconhecer seletivamente o epítopo mutante. Os experimentadores devem confirmar a especificidade utilizando células que expressem EGFR do tipo selvagem como controle negativo.
• Para Western blotting, considere utilizar lisados proteicos de linhagens celulares humanas de câncer conhecidas por apresentar a mutação EGFR E746-A750del (por exemplo, HCC827, H1975) ou proteína recombinante de EGFR mutante.
• Para ELISA, recomenda-se revestir a placa com proteína recombinante de EGFR E746-A750del. Observe que pode ocorrer reatividade cruzada com o EGFR do tipo selvagem; são necessários bloqueio adequado e otimização da diluição.
• As concentrações ideais de trabalho para WB e ELISA devem ser determinadas empiricamente; as diluições iniciais típicas para anticorpos policlonais variam de 1:500 a 1:2000.

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