Anticorpo Policlonal Coelho EGFR para WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P00533

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do EGFR

• O EGFR é uma tirosina quinase receptora que se liga a ligantes da família EGF (ex.: EGF, TGFA, AREG, BTC, epirregulina, HBEGF) para regular a proliferação, sobrevivência e diferenciação celular. Referências relacionadas: PMID:10805725, PMID:27153536, PMID:2790960
• A ligação do ligante induz dimerização e autofosforilação do receptor, ativando cascatas a jusante, incluindo as vias RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K/AKT, PLCγ/PKC, STATs e NF-κB. Referências relacionadas: PMID:27153536, PMID:11116146
• O EGFR também fosforila substratos não receptores, como RGS16 (modulando a sinalização de proteína G) e MUC1 (aumentando as interações SRC/β-catenina). Referências relacionadas: PMID:11602604, PMID:11483589
• O receptor localiza-se predominantemente na membrana celular, mas passa por tráfego para endossomos, aparelho de Golgi, retículo endoplasmático e núcleo, permitindo sinalização regulada espacialmente.
• Múltiplas modificações pós-traducionais (fosforilação, ubiquitinação, hidroxilação, metilação, palmitoilação) ajustam finamente a atividade, estabilidade e distribuição subcelular do EGFR.
• Expresso de forma ubíqua em tecidos normais; a isoforma 2, resultante de splicing alternativo, é notavelmente detectada em cânceres de ovário e pode funcionar como um antagonista do EGF.
• Além dos ligantes endógenos, o EGFR serve como receptor hospedeiro para a entrada do vírus da hepatite C (HCV), facilitando a internalização viral.
• Reconhecido como um proto-oncogene, a desregulação do EGFR (superexpressão ou mutações ativadoras) impulsiona inúmeros cânceres, posicionando-o como um alvo terapêutico central.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno (aa 1021–1210) está localizado dentro do domínio citoplasmático, que é preservado em condições comuns de desnaturação; considere usar lise com RIPA padrão e SDS-PAGE redutora para Western blotting com linhagens celulares positivas (ex.: A431, HeLa) e negativas apropriadas.
• Para IHC-P, protocolos de recuperação antigênica (ex.: tampão citrato pH 6.0 ou Tris-EDTA pH 9.0) podem requerer otimização, pois o EGFR é uma glicoproteína transmembrana frequentemente intensamente N-glicosilada.
• Embora a reatividade cruzada seja relatada para humano, camundongo e rato, recomendamos verificar a reatividade específica da espécie e a especificidade do sinal em seu sistema experimental, particularmente ao usar modelos geneticamente modificados.
• Devido ao alto peso molecular (~134 kDa), use géis de SDS-PAGE a 8% ou gradiente e otimize as condições de transferência (ex.: transferência úmida durante a noite ou semi-seca com baixo teor de metanol) para Western blotting.
• Em experimentos de imunoprecipitação (IP), o pré-limpamento dos lisados e o uso de um controle de isotipo IgG de coelho podem ajudar a reduzir a ligação inespecífica.
• Ao desenvolver um ELISA, emparelhar este anticorpo policlonal com um anticorpo monoclonal de captura pode melhorar a sensibilidade do ensaio; realize titulações em tabuleiro de damas para determinar as concentrações ótimas.

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