mAb de coelho para ESRα para WB - P03372

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Receptor de Estrogênio

• O receptor alfa de estrogênio (ERα), também conhecido como ER-alfa, receptor de estradiol e receptor nuclear subfamília 3 grupo A membro 1 (NR3A1), é codificado pelo gene ESR1 e pertence à superfamília dos receptores hormonais nucleares.
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas, algumas delas sem domínios funcionais, que podem modular a atividade transcripcional do receptor de comprimento completo por meio de ligação competitiva a ligantes ou DNA e heterodimerização. Referências relacionadas: PMID:10970861
• Ao se ligar ao 17β-estradiol, o ERα sofre uma mudança conformacional que promove a homodimerização e a ligação direta aos elementos de resposta a estrogênio (ERE) nos promotores dos genes alvo, ou se associa a outros fatores de transcrição (por exemplo, AP-1, Sp1, NF-κB) para regular a transcrição independente de ERE.
• O ERα também medeia a sinalização rápida de estrogênio iniciada na membrana, ativando várias cascatas de quinases, e é essencial para a regulação transcripcional mediada por MTA1 de BRCA1 e BCAS3. Referências relacionadas: PMID:17922032
• Está envolvido na ativação da NOS3 e na produção de óxido nítrico endotelial, contribuindo para a homeostase vascular. Referências relacionadas: PMID:21937726
• Se localiza predominantemente no núcleo, mas também é encontrado no citoplasma, membrana celular e aparelho de Golgi; sua distribuição subcelular é regulada dinamicamente pela ligação de ligantes e por modificações pós-traduccionais.
• As modificações pós-traduccionais incluem fosforilação, palmitoilção, metilação, ubiquitinação e glicosilação, que influenciam a estabilidade, localização e atividade transcripcional do receptor.
• É amplamente expresso em muitos tecidos, mas notavelmente ausente na glândula pituitária. Referências relacionadas: PMID:10970861

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos resíduos 495–595 da região C-terminal da ESRα humana. Esta região pode estar presente em múltiplas isoformas, mas é recomendado verificar a especificidade da isoforma usando linhas celulares que expressam variantes de splicing distintas.
• Para Western blot (WB), o peso molecular previsto é de 66 kDa; use marcadores pré-coloridos para confirmação do tamanho e otimize as condições de bloqueio para reduzir a ligação inespecífica.
• Ao realizar imunoprecipitação (IP), prepare lisados frescos com inibidores de protease e fosfatase apropriados para manter a estabilidade do ERα.
• Para imunoprecipitação de cromatina (ChIP), otimize cuidadosamente os parâmetros de reticulação e sonicação, pois as interações do ERα com a cromatina podem ser transitórias e dependentes da estimulação por ligante.
• Na citometria de fluxo (coloração intracelular), inclua um controle de isotipo e valide protocolos de permeabilização adequados para antígenos nucleares.
• Para ELISA, titule o anticorpo como reagente de captura ou detecção contra a proteína ERα recombinante para estabelecer as concentrações de trabalho ideais.
• Todas as aplicações foram validadas com amostras humanas; a reatividade com outras espécies deve ser confirmada experimentalmente.

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