Anticorpo Monoclonal IKKβ de Coelho para IF/ICC e ELISA - O14920

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da IKKβ

• A IKKβ (subunidade beta da quinase inibidora do fator nuclear kappa-B), também conhecida como IKK2 ou NFKBIKB, é uma proteína quinase serina/treonina codificada pelo gene IKBKB e é um componente central do complexo canônico IKK que ativa a sinalização de NF-κB (PubMed:9346484). Referências relacionadas: PMID:9346484

• Ela fosforila os inibidores de NF-κB (IκB) em dois resíduos de serina críticos, desencadeando sua poliubiquitinação e degradação proteassômica, permitindo que NF-κB se transloque para o núcleo e ative a transcrição gênica (PubMed:20434986, PubMed:20797629, PubMed:21138416). Referências relacionadas: PMID:20434986, PMID:20797629, PMID:21138416

• Além de IκB, IKKβ fosforila componentes adicionais da via, incluindo NEMO/IKBKG, RELA, NFKB1, TBK1 e IKBKE, que podem atuar como um mecanismo de feedback negativo para evitar a produção excessiva de mediadores inflamatórios (PubMed:11297557, PubMed:14673179, PubMed:20410276). Referências relacionadas: PMID:11297557, PMID:14673179, PMID:20410276

• A quinase também fosforila FOXO3, mediando a inativação dependente de TNF desse fator de transcrição pró-apoptótico (PubMed:15084260), e outros substratos como NAA10, NCOA3, BCL10 e IRS1 (PubMed:17213322, PubMed:19716809). Referências relacionadas: PMID:15084260, PMID:17213322, PMID:19716809

• A IKKβ está envolvida na ativação de IRF5 por fosforilação de seu C-terminal para estimular a homodimerização e translocação nuclear (PubMed:25326418), e em resposta ao LPS, ela fosforila STAT1 em Thr-749, modulando a expressão de genes inflamatórios (PubMed:32209697, PubMed:38621137). Referências relacionadas: PMID:25326418, PMID:32209697, PMID:38621137

• Subcelularmente, a IKKβ é encontrada no citoplasma, núcleo e membranas rafts. É altamente expressa no coração, placenta, músculo esquelético, rim, pâncreas, baço, timo, próstata, testículo e sangue periférico.

• As modificações pós-traducionais incluem acetilação, hidroxilação, fosforilação, S-nitrosilação e ubiquitinação, refletindo sua regulação rigorosa.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno usado para gerar este anticorpo monoclonal de coelho cobre os aminoácidos 450-756, correspondentes à região C-terminal da IKKβ humana. Este design pode proporcionar reconhecimento específico da IKKβ de comprimento completo em conformações desnaturadas ou nativas.
• Para IF/ICC, considere usar protocolos adequados de fixação (por exemplo, 4% de PFA) e permeabilização (por exemplo, 0,1% de Triton X-100), e valide o anticorpo em linhas celulares que expressam IKKβ, como HeLa ou HEK293.
• Em aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser usado para detecção direta ou sandwich; recomenda-se a otimização do antígeno de revestimento e da diluição do anticorpo.
• Como o anticorpo é produzido em coelho, selecione anticorpos secundários compatíveis para detecção e considere a possível reatividade cruzada com imunoglobulinas endógenas em amostras de tecido.
• Sempre inclua controles positivos e negativos (por exemplo, lisados de knockout de IKKβ ou peptídeos de bloqueio) para confirmar a especificidade.

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