[KD Validado] Anticorpo Policlonado de Coelho Anti-eIF4E para WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P06730

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do eIF4E

• eIF4E (codificado por EIF4E; apelidos EIF4EL1, EIF4F) é uma proteína de ligação à capa de mRNA de 25 kDa e a subunidade essencial de reconhecimento de capa do complexo de iniciação da tradução eIF4F, que impulsiona a tradução dependente de capa ao facilitar o recrutamento do pré-complexo 43S para a extremidade 5' do mRNA. Referências relacionadas: PMID:11606200 PMID:22578813 PMID:22684010
• Ele se liga especificamente à estrutura de capa 7-metilguanosina (m7G) dos mRNAs e promove o desdobramento dependente de ATP das estruturas secundárias terminais 5', uma etapa crítica para a ligação e varredura do ribossomo. Referências relacionadas: PMID:16271312 PMID:22578813
• No núcleo, o eIF4E medeia a exportação de mRNA ao formar complexos com LRPPRC e XPO1; ele facilita o transporte nucleocitoplasmático de transcritos específicos, como NOS2/iNOS e MDM2, influenciando assim sua expressão citoplasmática. Referências relacionadas: PMID:23471078 PMID:22684010
• Nos corpos P citoplasmáticos, o eIF4E participa de um complexo que sequestra mRNAs translationalmente inativos, evitando sua degradação e permitindo o armazenamento ou reativação translacional posterior. Referências relacionadas: PMID:24335285
• Junto com EIF4G1, o eIF4E é necessário para a tradução dependente de TISU (Iniciador de Tradução de UTR 5' Curto), um mecanismo não de varredura que dispensa a necessidade da varredura promovida por eIF1. Referências relacionadas: PMID:29987188
• O eIF4E se localiza em vários compartimentos subcelulares: citoplasma (incluindo corpos P e grânulos de estresse) e núcleo (manchas nucleares, corpos nucleares), uma distribuição que reflete suas funções duplas na tradução e exportação de RNA.
• A proteína é modificada pós-traducionalmente por acetilação e fosforilação, que modulam sua afinidade de ligação à capa e interação com parceiros de ligação.
• A desregulação do eIF4E está associada ao transtorno do espectro autista e tumorigênese, frequentemente por meio de rearranjos cromossômicos ou superexpressão que alteram os programas de tradução celular.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno está localizado na região N-terminal (aa 1-100), uma área não fortemente modificada; esses anticorpos podem detectar tanto eIF4E fosforilado quanto não fosforilado, mas os usuários devem verificar a especificidade em seus próprios sistemas.
• Para Western blot, espera-se uma banda principal em ~25 kDa; o peso molecular relatado do eIF4E é 25 kDa (teórico ~25,1 kDa), e pode aparecer como uma banda única ou em dupla dependendo do estado de fosforilação.
• Em IHC-P, as condições de recuperação de antígeno (ex: tampão de citrato pH 6,0) devem ser otimizadas; controles positivos incluem tecidos com alta expressão de eIF4E, como testículo, células em proliferação ou certas seções tumorais.
• Para imunoprecipitação, use esferas de proteína A ou G adequadas para anticorpos policlonados de coelho; a ligação cruzada do anticorpo às esferas pode melhorar a recuperação de complexos de baixa abundância.
• IF/ICC pode revelar marcação tanto citoplasmática quanto nuclear; inclua etapas adequadas de permeabilização e bloqueio, e considere a co-marcação com marcadores de corpo P ou nucleares para avaliar alterações na localização.

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