Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Sharpin Validado por KD para WB, IF/ICC, ELISA - Q9H0F6

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Sharpin

• O Sharpin (proteína de interação com o domínio RH associada à Shankin), também conhecido como SIPL1 (proteína semelhante à de interação com Shank 1), é um componente do complexo de montagem da cadeia de ubiquitina linear (LUBAC). O LUBAC conjuga cadeias de poliubiquitina linear de cabeça para cauda em substratos, desempenhando um papel fundamental na ativação de NF-kappa-B e na regulação da inflamação.
  Referências relacionadas:
  PMID:21455173 PMID:21455180 PMID:21455181
• Através do LUBAC, o Sharpin medeia a ubiquitinação linear de IKBKG (NEMO) e RIPK1, o que é essencial para as vias de sinalização canônica de NF-kappa-B e JNK. Esta modificação interfere com a morte celular induzida por TNF, prevenindo assim a inflamação.
  Referências relacionadas:
  PMID:21455173 PMID:21455180 PMID:21455181
• Na imunidade inata, o LUBAC contendo Sharpin conjuga cadeias de poliubiquitina linear na superfície de bactérias que invadem o citosol, formando um revestimento de ubiquitina que serve como sinal de "coma-me" para xenofagia e promove a ativação de NF-kappa-B. O LUBAC estende a ubiquitina pré-existente em vez de iniciar a ubiquitinação.
  Referências relacionadas:
  PMID:28481331
• O Sharpin também participa da regulação da sinalização Wnt canônica durante a angiogênese, juntamente com a deubiquitinase OTULIN, modulando eventos de ubiquitinação linear.
  Referências relacionadas:
  PMID:23708998
• A proteína localiza-se predominantemente no citoplasma e citosol, e também é encontrada em sinapses, consistente com seus papéis na transdução de sinais e função neuronal.
• A expressão é mais alta no músculo esquelético e placenta, com níveis mais baixos no cérebro, coração, cólon, timo, baço, rim, fígado, intestino delgado, pulmão e leucócitos de sangue periférico. O Sharpin é regulado positivamente em vários tecidos tumorais, incluindo rim, fígado, ovário e pâncreas.
• O Sharpin contém domínios de dedo de zinco e é uma fosfoproteína, indicando regulação por modificações pós-traducionais. Está sujeito a splicing alternativo, gerando múltiplas isoformas.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O anticorpo foi produzido contra um fragmento N-terminal (aa 1-126) do Sharpin humano. Esta região pode ser conservada nas isoformas conhecidas; considere verificar a cobertura de isoformas, se aplicável.
• Para Western blot (WB), espera-se uma banda de aproximadamente 40 kDa. Use lisados de controle positivo como HeLa ou HEK293, que expressam Sharpin.
• Em imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC), espere principalmente padrões de coloração citoplasmática e possivelmente sináptica. Otimize a fixação e permeabilização para o tipo celular de interesse.
• A aplicação ELISA é possível; realize a titulação apropriada do anticorpo e use a proteína recombinante Sharpin como padrão.
• Como o Sharpin está envolvido na sinalização de TNF, a estimulação com TNF-alfa pode afetar sua localização ou formação de complexos, o que pode ser investigado usando este anticorpo.

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