Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-TFEB Validado por KD para WB, IHC-P, ELISA, ChIP - P19484

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do TFEB

• TFEB (Fator de Transcrição EB), também conhecido como proteína básica hélice-alça-hélice classe E 35 (bHLHe35), pertence à subfamília MiT/TFE dos fatores de transcrição básicos hélice-alça-hélice zíper de leucina (bHLH-Zip), que inclui MITF e TFE3.
• Funciona como um regulador mestre da biogênese lisossomal e autofagia, ligando-se a motivos de expressão e regulação lisossomal coordenada (CLEAR) (5′-GTCACGTGAC-3′) nos promotores de genes lisossomais e autofágicos. Referências relacionadas: PMID:19556463, PMID:22692423
• A atividade do TFEB é rigidamente controlada por fosforilação sensível a nutrientes: em condições de alimentação, a fosforilação mediada por mTOR em múltiplos resíduos de serina retém o TFEB no citosol; a privação ou estresse lisossomal inibe a mTOR, levando à rápida desfosforilação e translocação nuclear. Referências relacionadas: PMID:21617040, PMID:22343943, PMID:22576015
• No núcleo, o TFEB dimeriza consigo mesmo ou com outros membros da família MiT/TFE para ativar a transcrição de genes-alvo envolvidos em autofagia, metabolismo lipídico, homeostase energética e defesa imunológica. Referências relacionadas: PMID:1748288, PMID:29146937
• Além disso, o TFEB desempenha um papel na imunidade adaptativa, regulando a expressão de CD40L em células T, e na imunidade inata antibacteriana através da alquilação mediada por itaconato que promove sua localização nuclear e biogênese lisossomal. Referências relacionadas: PMID:35662396
• A localização subcelular é dinâmica: principalmente citoplasmática quando fosforilado, transloca-se para o núcleo após ativação; também pode associar-se à membrana lisossomal.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 50–173 do TFEB humano (NP_009093.1). Esta região está dentro do domínio de ativação transcricional N-terminal, que é relativamente conservado entre humano, camundongo e rato, apoiando a reatividade cruzada relatada. Para espécies não listadas, recomenda-se o alinhamento de sequências.
• Para Western blot, o TFEB pode aparecer como um dupleto entre 44 e 53 kDa devido a fosforilação diferencial ou splicing alternativo; o uso de inibidores de fosfatase frescos no tampão de lise pode ajudar a preservar as isoformas fosforiladas. O anticorpo foi validado para especificidade de knockdown (Validado por KD).
• Na imuno-histoquímica (IHC-P), as condições de recuperação antigênica devem ser otimizadas para o seu tipo de tecido. Coloração nuclear e citoplasmática pode ser observada dependendo do estado de ativação do TFEB.
• Para ChIP, certifique-se de que as condições de reticulação e cisalhamento estão otimizadas para o seu tipo celular; o anticorpo deve enriquecer eficientemente as regiões promotoras contendo sequências CLEAR ou E‑box.
• Execute controles positivos e negativos apropriados (por exemplo, lisados de células knockout para TFEB, loci de genes-alvo conhecidos) ao estabelecer os ensaios.

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