[Validado por KD] Anticorpo Monoclonal Anti-YTHDC1 para WB, IHC-P, IP, ELISA - Q96MU7

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do YTHDC1

• Proteína 1 contendo domínio YTH (YTHDC1), também conhecida como YT521-B ou fator de splicing YT521, é um membro da família de domínios YTH de proteínas de ligação ao RNA que reconhece especificamente RNAs modificados por N6-metiladenosina (m6A). Referências relacionadas: PMID:25242552, PMID:26318451, PMID:26876937

• O YTHDC1 funciona como um regulador chave do splicing alternativo, onde se liga a pré-mRNAs contendo m6A e recruta fatores de splicing. A interação com SRSF3 promove a inclusão de éxons, enquanto a competição com SRSF10 leva à inibição do salto de éxons. Referências relacionadas: PMID:26876937

• Também desempenha um papel na exportação nuclear de mRNAs modificados por m6A através da ligação simultânea ao SRSF3 e ao fator de exportação nuclear NXF1, facilitando o tráfego de mRNA do núcleo para o citoplasma. Referências relacionadas: PMID:28984244

• O YTHDC1 está envolvido na regulação da inativação do cromossomo X ao reconhecer m6A no RNA Xist e promover sua atividade de repressão transcricional, contribuindo assim para o silenciamento de um cromossomo X em mamíferos fêmeas. Referências relacionadas: PMID:27602518

• Além do RNA, o YTHDC1 também pode se ligar ao DNA de fita simples contendo m6A, sugerindo papéis mais amplos em processos mediados por ácidos nucleicos. Referências relacionadas: PMID:32663306

• Subcelularmente, o YTHDC1 localiza-se predominantemente no núcleo e é enriquecido em "speckles" nucleares, que são locais de armazenamento e modificação para fatores de splicing, consistente com seu papel no processamento de pré-mRNA.

• Modificações pós-traducionais incluem fosforilação e ubiquitinação (formação de ligação isopeptídica), que podem regular sua atividade e estabilidade. A proteína tem um peso molecular previsto de 84,7 kDa, com uma banda observada em aproximadamente 85 kDa por "western blotting".

• O YTHDC1 é essencial para o desenvolvimento da linhagem germinativa, com estudos em organismos modelo mostrando sua necessidade para o desenvolvimento de espermatogônias em machos e o crescimento de oócitos em fêmeas, provavelmente através de suas funções de splicing alternativo.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos 71 aminoácidos terminais N do YTHDC1 humano. Como o epítopo se mapeia para uma região compartilhada por múltiplas variantes de splicing, o anticorpo pode detectar várias isoformas; a validação na linhagem celular ou tecido relevante é recomendada.
• A análise de "western blot" usando este anticorpo deve mostrar uma banda próxima de 85 kDa. Lisados de células humanas, de camundongo ou de rato podem ser usados, mas o padrão preciso de banda deve ser confirmado nas condições experimentais empregadas.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P), um sinal predominantemente nuclear, frequentemente concentrado em "speckles" nucleares, é antecipado. A otimização da recuperação de antígeno e da diluição do anticorpo pode ser necessária para cada tipo de tecido.
• O anticorpo é adequado para imunoprecipitação (IP) de YTHDC1 endógeno; a co-imunoprecipitação de parceiros de interação como SRSF3 pode ser explorada com controles apropriados.
• Aplicações de ELISA podem ser desenvolvidas usando este anticorpo como reagente de captura ou detecção; o emparelhamento com um detector policlonal ou um par de anticorpos combinado é aconselhável para formatos de ELISA sanduíche.
• A validação por "knockdown" (KD) confirma que o sinal é reduzido após a depleção de YTHDC1, apoiando sua especificidade para identificação de alvo em estudos de silenciamento gênico.

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