[KO Validado] Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-AIF para WB, IF, IHC, ELISA - O95831

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do AIF

• O AIF, também conhecido como proteína 8 de morte celular programada (PDCD8), é codificado pelo gene AIFM1 em humanos. Múltiplos isoformas existem devido ao splicing alternativo, incluindo um isoforma pró-apoptótico e variantes específicas do cérebro.
• O AIF funciona como uma NADH oxidorredutase no metabolismo mitocondrial normal e como um regulador chave da apoptose independente de caspase. Após estímulo apoptótico, é liberado do espaço intermembranar mitocondrial para o citosol e núcleo, onde desencadeia condensação da cromatina e fragmentação de DNA em larga escala (parthanatos). Referências relacionadas: PMID:17094969 PMID:20362274 PMID:23217327
• No núcleo, o AIF liga-se ao DNA de maneira independente de sequência e induz fragmentação cromossômica de DNA independente de caspase, uma característica do parthanatos. Referências relacionadas: PMID:27178839 PMID:20362274
• O AIF interage com o EIF3G para inibir a síntese proteica, bloqueando a maquinaria de tradução EIF3, e ativa a caspase-7, amplificando assim a apoptose. Referências relacionadas: PMID:17094969
• O AIF desempenha um papel crítico na morte celular picnótica, independente de caspase, induzida pela exposição ao peróxido de hidrogênio. Referências relacionadas: PMID:19418225
• Na homeostase mitocondrial, o AIF participa da biogênese da cadeia respiratória, interagindo com o CHCHD4 e controlando sua importação mitocondrial. Referências relacionadas: PMID:26004228
• O AIF está predominantemente localizado no espaço intermembranar e na membrana interna da mitocôndria em condições normais. Durante a apoptose, transloca-se para o citoplasma, região perinuclear e núcleo.
• O AIF é expresso em todos os tecidos humanos testados, exceto no cérebro (isoforma 5). É detectado em músculo, fibroblastos da pele e osteoblastos. Notavelmente, a isoforma 5 é frequentemente regulada negativamente em vários cânceres humanos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região C-terminal (aa 334-613) do AIF humano, o que pode permitir o reconhecimento de múltiplas variantes de splicing. Para aplicações como Western blot (WB), espere uma banda em torno de 67 kDa. Considere o uso de lisados validados por nocaute (KO) para confirmar a especificidade.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), observe que o AIF localiza-se predominantemente nas mitocôndrias em células saudáveis, mas transloca-se para o núcleo após indução de apoptose. As condições de fixação e permeabilização devem ser otimizadas para preservar a coloração tanto mitocondrial quanto nuclear.
• Na imuno-histoquímica (IHC-P), o recuperação antigênica pode ser necessária para desmascarar epítopos; teste protocolos padrão à base de citrato ou EDTA. Valide em tecidos de controle positivo (ex: músculo, pele) que expressam AIF.
• Para ELISA, a natureza policlonal permite o uso tanto como anticorpo de captura quanto de detecção em formatos sanduíche, mas o pareamento com um monoclonal pode reduzir o fundo.

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