Anticorpo policlonal de coelho anti-ATG4D validado para KO para WB e ELISA - Q86TL0

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da ATG4D

• ATG4D (também conhecida como APG4D, AUTL4, autofagina-4 ou HsAPG4D) é um membro da família de cisteín proteases ATG4 que desempenha um papel central na autofagia.
• Ativação proteolítica: ATG4D cliva o aminoácido C-terminal de proteínas da família ATG8, incluindo MAP1LC3 e GABARAPL2, para expor uma glicina essencial para a conjugação com fosfatidiletanolamina (PE) e posterior inserção na membrana (PubMed:21177865). Referências relacionadas: PMID:21177865
• Atividade de delipidação: Além da ativação, ATG4D catalisa a delipidação de proteínas ATG8 conjugadas a PE durante a macroautofagia e remove conjugados de fosfatidilserina (PS) na autofagia não canônica (PubMed:29458288, PubMed:33909989). Referências relacionadas: PMID:29458288 PMID:33909989
• Especialização em delipidação: Comparado a ATG4A, ATG4B e ATG4C, ATG4D é a principal enzima de delipidação para proteínas da família ATG8, com atividade de ativação proteolítica comparativamente mais fraca.
• Papel na mitofagia: ATG4D promove a expansão do fagóforo durante a mitofagia regulando o tráfego de ATG9A para as mitocôndrias e facilitando os contatos entre retículo endoplasmático e fagóforo, independente da sua função protease (PubMed:33773106). Referências relacionadas: PMID:33773106
• Vínculo com a apoptose: A importação mitocondrial de ATG4D sob estresse celular ou diferenciação liga a disfunção mitocondrial à apoptose, influenciando a fisiologia mitocondrial, os níveis de ROS e a viabilidade celular.
• Localização subcelular: ATG4D reside no citoplasma e pode se translocar para a matriz mitocondrial.
• Expressão tecidual: É amplamente expressa no testículo e está associada a processos como apoptose, autofagia e transporte de proteínas mediado por tiol protease.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno (aminoácidos 1–230 da ATG4D humana) cobre o domínio catalítico N-terminal, que é altamente conservado entre humano, camundongo e rato, o que é consistente com a reatividade cruzada descrita. Recomenda-se o uso de lisados controle específicos da espécie para confirmar a reatividade no seu ensaio.
• Para aplicações de Western blot (WB), o peso molecular esperado é de aproximadamente 53 kDa. Como a expressão de ATG4D pode variar dependendo do tipo celular e das condições de estresse, recomendamos validar o anticorpo na sua matriz de amostra específica.
• O anticorpo foi validado para knockout (KO) em certas linhas celulares, fornecendo fortes evidências de especificidade. Ainda assim, é aconselhável realizar sua própria validação com controles positivos e negativos adequados.
• Em ELISA, usar o imunógeno recombinante como antígeno de revestimento ou padrão pode ajudar a otimizar as condições do ensaio. Realize a titulação do anticorpo para determinar a concentração de trabalho ideal para o formato da sua placa.

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