[KO Validado] Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Caspase-8 para WB, ELISA - Q14790

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Caspase-8

• A Caspase-8 (também designada FLICE, MACH, MCH5) é uma caspase iniciadora de 55 kDa da família das proteases cisteína-aspárticas, produzida em múltiplas isoformas por splicing alternativo; a isoforma 1 de comprimento total é cataliticamente ativa, enquanto isoformas mais curtas podem atuar como inibidores dominantes negativos.
• Como o iniciador chave da apoptose extrínseca, a Caspase-8 é recrutada pelo adaptador FADD para os complexos de receptores de morte (DISC) após estimulação por FAS ou TNFRSF1A, levando à sua dimerização, clivagem autocatalítica e ativação subsequente das caspases efetoras a jusante (CASP3/7) e BID para executar a morte celular. Referências relacionadas: PMID:8681376, PMID:8681377, PMID:9184224
• Além da apoptose, a Caspase-8 regula negativamente a necroptose ao clivar RIPK1 em Asp-324, o que inibe a atividade quinase de RIPK1 e previne a sinalização necroptótica e inflamatória induzida por TNF. Referências relacionadas: PMID:31827280, PMID:31827281
• A Caspase-8 também medeia a piroptose ao clivar e ativar a gasdermina C (GSDMC) e a gasdermina D (GSDMD), liberando seus domínios N-terminais formadores de poros que causam ruptura da membrana e morte celular inflamatória. Referências relacionadas: PMID:32929201, PMID:34012073
• Ela se localiza predominantemente no citoplasma, mas também pode ser encontrada no núcleo e em lamellípodes; a fosforilação em Tyr-380, independente de sua atividade proteolítica, promove a migração celular. Referências relacionadas: PMID:18216014, PMID:27109099
• A Caspase-8 é amplamente expressa, com os maiores níveis de mRNA em leucócitos do sangue periférico, baço, timo e fígado, e expressão muito baixa em cérebro, testículo e músculo esquelético.
• Além disso, a Caspase-8 cliva PARP1 e PARP2 durante a apoptose, e pode participar das vias de morte celular citotóxica mediada por Granzyme B. Referências relacionadas: PMID:8681376, PMID:8755496

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos resíduos 200-300 dentro do domínio catalítico da Caspase-8 humana; esta região está presente no proenzima de comprimento total e na subunidade catalítica grande, portanto o anticorpo pode detectar tanto as formas não processadas quanto as clivadas.
• Para Western blot, realize a SDS-PAGE em condições redutoras; espere uma banda principal em ~55 kDa (comprimento total) e, dependendo do tratamento celular, bandas menores que representam os fragmentos ativos p18/p10. Sempre inclua marcadores de peso molecular.
• Este anticorpo é reportadamente validado por KO; considere usar lisados de células com knockout de Caspase-8 como controle negativo para confirmar a especificidade da banda no seu sistema experimental.
• Para aplicações de ELISA, realize uma titulação em tabuleiro de xadrez para estabelecer as concentrações ótimas do antígeno de revestimento e do anticorpo; valide contra um padrão conhecido, se disponível.
• Ao estudar a ativação da Caspase-8, trate as células com indutores apropriados (por exemplo, TNF-α + cicloheximida para apoptose, ou TNF-α + zVAD + mimético de Smac para necroptose) e monitore a cinética de clivagem para distinguir entre as modalidades de morte.
• A reatividade cruzada é reportada apenas para humanos; se aplicar a outras espécies, alinhe a sequência do peptídeo imunogênico com a Caspase-8 do organismo alvo para avaliar a reatividade potencial.

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