[KO Validado] Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-CDK4 para WB, IP, IHC-P, ELISA - P11802

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CDK4

• A quinase 4 dependente de ciclina (CDK4) é uma serina/treonina-proteína quinase e um regulador chave da transição G1/S do ciclo celular. Ela forma complexos com ciclinas do tipo D para fosforilar proteínas da família da retinoblastoma (RB), liberando fatores de transcrição E2F e promovendo a progressão do ciclo celular.
• Ao contrário de algumas outras CDKs, a CDK4 é relativamente específica para a fase G1, onde ela hipofosforila a RB1 no início de G1, permitindo a subsequente hiperfosforilação por complexos ciclina E-CDK2.
• A CDK4 localiza-se no citoplasma, núcleo e membrana nuclear, e sua translocação nuclear é regulada pelo complexo ternário ciclina D/CDK4/CDKN1B.
• O splicing alternativo do CDK4 gera múltiplos isoformas, e as modificações pós-traducionais incluem acetilação e fosforilação, que modulam sua atividade e estabilidade.
• Além das proteínas RB, a CDK4 fosforila o SMAD3 de maneira dependente do ciclo celular, reprimindo sua atividade transcricional e ligando a sinalização do TGF-β ao controle do ciclo celular.
• A CDK4 integra vários sinais mitogênicos e antimitogênicos, tornando-a um nó crítico no controle da proliferação; sua desregulação é frequentemente observada no câncer, e é um lócus de variante de doença conhecido.
• Palavras-chave associadas ao CDK4 incluem ligação a ATP, ligação a nucleotídeo, transferase, fosfoproteína e proteoma de referência, destacando seus papéis enzimáticos e regulatórios.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno para este anticorpo compreende um peptídeo sintético correspondente aos aminoácidos 204–303 do CDK4 humano, que se encontra na região C-terminal. Espera-se, portanto, que o anticorpo reconheça o CDK4 de comprimento total e também possa detectar fragmentos C-terminais, se presentes.
• Para western blot, uma banda específica em torno de 34 kDa é esperada, consistente com o peso molecular previsto do CDK4. Variações leves no peso molecular observado podem ocorrer devido a modificações pós-traducionais ou expressão de isoformas.
• A validação por knockout fornece forte evidência de especificidade. Como uma prática recomendada, considere incluir um lisado de células knockout para CDK4 como controle negativo para confirmar a identidade da banda em seu sistema experimental.
• Na imunoprecipitação, use condições de lise nativas para preservar as interações proteína-proteína se estiver estudando complexos de CDK4. A origem monoclonal de coelho do anticorpo geralmente garante alta afinidade e consistência entre lotes.
• Para experimentos de imuno-histoquímica (parafina), a recuperação antigênica pode ser necessária; a otimização do tampão de recuperação e do protocolo é recomendada para cada tipo de tecido.
• Embora o anticorpo seja validado para múltiplas espécies (humano, camundongo, rato, macaco), sempre verifique a reatividade cruzada em sua amostra específica devido a possíveis variações de sequência.

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