[KO Validado] Anticorpo Policlonico de Coelho Anti-CDKN2A/p16INK4a para WB, IF/ICC, ELISA - P42771 / Q8N726

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de CDKN2A/p16INK4a

• CDKN2A codifica o inibidor 2A da quinase dependente de ciclina, também conhecido como p16INK4a, supressor tumoral múltiplo 1 (MTS-1) e CDK4I. Ele atua como regulador negativo da progressão do ciclo celular ao inibir CDK4 e CDK6, evitando a fosforilação da proteína do retinoblastoma.
• A proteína se localiza tanto no citoplasma quanto no núcleo, o que é consistente com seu papel no controle da entrada no ciclo celular.
• CDKN2A é amplamente expressa em tecidos normais, com exceções incluindo o cérebro e o músculo esquelético. A isoforma 3 apresenta expressão específica do pâncreas.
• p16INK4a é um supressor tumoral frequentemente mutado ou deletado em vários cânceres, incluindo a síndrome de Li-Fraumeni, o que destaca seu papel crítico na manutenção da estabilidade genômica.
• A proteína sofre modificações pós-traducionais como acetilação e fosforilação, que podem regular sua atividade e estabilidade.
• p16INK4a contém motivos de repetição ANK, que facilitam as interações proteicas essenciais para sua função inibitória sobre CDK4/6.
• Estudos funcionais demonstram que a indução de p16INK4a leva à parada do ciclo celular na fase G1, destacando sua importância na senescência e na supressão tumoral.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético correspondente aos aminoácidos 1–156 da p16INK4a humana (NP_000068.1). Para Western blotting, considere usar lisados de células totais de linhagens celulares humanas conhecidas por expressar CDKN2A. Como o produto é validado por KO, recomenda-se incluir um lisado controle de knockout de CDKN2A para confirmar a especificidade da banda.
• O peso molecular previsto de p16INK4a é de aproximadamente 16 kDa, embora múltiplas isoformas (8–17 kDa) possam ser detectadas devido ao splicing alternativo e às modificações pós-traducionais. Otimize a porcentagem do gel e as condições de transferência para proteínas de baixo peso molecular.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), recomenda-se fixação apropriada (por exemplo, 4% de paraformaldeído) e permeabilização (por exemplo, 0,1% de Triton X-100). p16INK4a se localiza tanto no núcleo quanto no citoplasma, portanto a imagem deve capturar toda a célula.
• Em aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção após validação contra o antígeno alvo. Garanta buffer de revestimento e etapas de bloqueio adequados para obter sinal ideal.

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