[KO Validado] Anticorpo Policlonal Anti-HER2/ErbB2 para WB, ELISA - P04626

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do HER2/ErbB2

• O HER2/ErbB2 é uma tirosina-proteína-quinase receptora codificada pelo gene ERBB2 (GeneID: 2064) e membro da família de receptores do fator de crescimento epidérmico (EGFR/ErbB). A proteína de comprimento total é uma proteína de membrana do tipo I de passagem única, composta por 1255 aminoácidos, com peso molecular previsto de 137,9 kDa (observado em aproximadamente 138 kDa).
• Atua como correceptor em complexos receptor-neuregulina, sendo essencial para a sinalização dependente de ligante, mas requer heterodimerização com outros membros da família ErbB (por exemplo, EGFR, ErbB3 e ErbB4) para a ligação de ligantes de alta afinidade e a ativação da quinase.
• A sinalização do HER2 regula o crescimento e a estabilização dos microtúbulos periféricos por meio da via MEMO1-RHOA-DIAPH1, inibindo a GSK3B e promovendo a associação de APC e CLASP2 à membrana, o que, por sua vez, facilita a captura e a estabilização dos microtúbulos.
• No núcleo, o HER2 atua como regulador transcricional, ligando-se ao promotor PTGS2/COX-2 (sequência 5’-TCAAATTC-3’) para ativar a transcrição, e também promove a expressão de CDKN1A por meio do envolvimento de STAT3 e SRC, bem como a transcrição de genes de rRNA pela RNA Pol I, aumentando a síntese proteica e o crescimento celular.
• A localização subcelular inclui a membrana celular, a membrana de ondulações, o endossomo inicial, o citoplasma (região perinuclear) e o núcleo, refletindo seus diversos papéis na sinalização e na transcrição.
• O HER2 é superexpresso em diversos tecidos tumorais, incluindo cânceres primários de mama, intestino delgado, esôfago, rim e cavidade oral, tornando-se um biomarcador e alvo terapêutico crítico.
• As principais modificações pós-traducionais incluem fosforilação (fosfoproteína) e glicosilação; a proteína também apresenta um peptídeo sinal, pontes dissulfeto e isoformas resultantes de iniciação e splicing alternativos.
• As palavras-chave do UniProt destacam seus papéis biológicos: ativador, splicing alternativo, ligação ao ATP, membrana celular, variante relacionada a doença, quinase, receptor, sinal, regulação da transcrição, transferase e transmembrana.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• A sequência do imunógeno (aa 1156–1255) está localizada no domínio citoplasmático C-terminal do HER2; portanto, espera-se que este anticorpo reconheça a forma de comprimento total (~138 kDa) em Western blot (WB), com possível detecção de isoformas truncadas ou resultantes de splicing alternativo caso mantenham este epítopo.
• Para WB, utilize condições redutoras; a proteína madura glicosilada e fosforilada pode migrar ligeiramente acima. Valide a especificidade da banda utilizando linhagens celulares positivas e negativas para HER2 (por exemplo, SK-BR-3 e MCF-7) e, se disponíveis, lisados validados por KO, conforme indicado pela validação do produto.
• Em aplicações de ELISA, considere utilizar o revestimento com peptídeo ou a captura direta do antígeno devido à localização intracelular do epítopo. Otimize as condições de revestimento e as diluições do anticorpo em matrizes de amostras relevantes.
• Devido à alta expressão em tumores, lisados de linhagens celulares de câncer de mama ou de tecidos tumorais podem produzir sinais intensos; inclua controles de carregamento apropriados e normalize em relação à proteína total.

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