Anticorpo Policlonale de Coelho Anti-HMGB1 Validado para KO para WB, IHC-P, ELISA - P09429

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da HMGB1

• A HMGB1 (proteína de alta mobilidade de grupo B1), codificada pelo gene HMGB1, é uma proteína ubíqua não histona associada à cromatina que também é secretada ativamente ou liberada passivamente para atuar como padrão molecular associado ao perigo (DAMP) e citocina/quimiocina.
• No núcleo, a HMGB1 se liga preferencialmente a estruturas de DNA não canônicas (fitas simples, cruciformes, superenrolado e Z-DNA) e dobra o DNA para facilitar a remodelação da cromatina e aumentar o acesso dos fatores de transcrição (PubMed:20123072). Ela participa de várias vias de reparo do DNA, incluindo reparo por excisão de nucleotídeos, reparo de mismatches e reparo por excisão de bases (PubMed:15014079, PubMed:16143102, PubMed:17803946, PubMed:19360789, PubMed:19446504). Referências relacionadas: PMID:20123072 PMID:15014079 PMID:16143102 PMID:17803946 PMID:19360789 PMID:19446504
• No citoplasma, a HMGB1 promove a autofagia ao interromper competitividade a interação BECN1:BCL2 (PubMed:20819940) e está envolvida na autofagia induzida por estresse oxidativo (PubMed:21395369). Referências relacionadas: PMID:20819940 PMID:21395369
• Extracelularmente, o estado redox da HMGB1 determina sua função: a HMGB1 totalmente reduzida atua como uma quimiocina, a forma dissulfeto como uma citocina pró-inflamatória e a forma sulfonila promove a tolerância imunológica (PubMed:23446148, PubMed:23519706, PubMed:23994764). Ela interage com múltiplos receptores de superfície, incluindo AGER/RAGE, TLR2 e TLR4, para induzir a liberação de citocinas e o recrutamento de células imunológicas (PubMed:12765338, PubMed:18354232, PubMed:19264983, PubMed:15607795, PubMed:20547845). Referências relacionadas: PMID:23446148 PMID:23519706 PMID:23994764 PMID:12765338 PMID:18354232 PMID:19264983 PMID:15607795 PMID:20547845
• A HMGB1 facilita a entrada do SARS-CoV e do SARS-CoV-2 ao regular a expressão dos receptores virais ACE2 e CTSL por meio da modulação da cromatina (PubMed:33147444) e é necessária para a reticulofagia induzida pela proteína ORF3A do SARS-CoV-2 (PubMed:35239449). Referências relacionadas: PMID:33147444 PMID:35239449
• Modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, fosforilação, ADP-ribosilação e oxidação, regulam dinamicamente a localização subcelular, a afinidade de ligação ao DNA e as atividades imunomoduladoras da HMGB1.
• A HMGB1 é expressa de forma ubíqua e foi detectada em plaquetas (PubMed:11154118). Referências relacionadas: PMID:11154118

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 69-168, cobrindo a caixa B conservada de HMG e parte da cauda C ácida. Esta região é altamente conservada entre humanos, camundongos e ratos, o que suporta a reatividade cruzada do anticorpo.
• Para Western blot, é esperada uma banda em torno de 25 kDa; observe que modificações pós-traducionais podem causar pequenos desvios. A validação em knockout foi realizada; considere incluir controles positivos e negativos apropriados.
• Para IHC-P, a recuperação de antígeno pode ser necessária. Otimize as condições de coloração usando controles de tecido positivo conhecidos (por exemplo, tecidos com alta expressão de HMGB1, como órgãos linfoides ou tumores).
• No ELISA, o anticorpo pode ser usado para captura ou detecção; no entanto, o pareamento com um anticorpo de detecção compatível deve ser validado para o formato de ensaio específico.
• Como a HMGB1 é um DAMP que pode ser liberado de células danificadas, evite lise celular excessiva ou danos ao tecido durante a preparação da amostra para minimizar o ruído de fundo.

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