[Validado por KO] Anticorpo monoclonal de coelho anti-LAMP2 para WB, IHC-P, IF/ICC, FC, ELISA - P13473

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da LAMP2

• A LAMP2 (glicoproteína de membrana 2 associada aos lisossomas) é uma proteína transmembranar do tipo I altamente glicosilada, também conhecida como CD107b ou LGP-96. Três isoformas principais (LAMP-2A, -2B e -2C) são produzidas por splicing alternativo, cada uma com distribuição tecidular e funções distintas na atividade lisossomal.
• Desempenha um papel essencial na biogénese lisossomal, na regulação do pH lisossomal e na autofagia. A LAMP2 inibe diretamente o canal de protões TMEM175, facilitando a acidificação lisossomal necessária para uma atividade ótima das hidrolases. Referências relacionadas: PMID:11082038, PMID:18644871, PMID:24880125, PMID:37390818
• A LAMP2 é um recetor central na autofagia mediada por chaperonas (CMA). Liga-se a proteínas substrato (por exemplo, GAPDH, GPX4 e NLRP3) que foram reconhecidas pela chaperona HSC70 e direciona-as para degradação lisossomal, especialmente em condições de privação de nutrientes. Referências relacionadas: PMID:11082038, PMID:18644871, PMID:24880125, PMID:36586411
• Durante a macroautofagia, a LAMP2 é necessária para a fusão dos autofagossomas com os lisossomas; as células sem LAMP2 não conseguem recrutar STX17 para os autofagossomas, impedindo a degradação da carga autofágica. Referência relacionada: PMID:27628032
• A LAMP2 contribui para a imunidade adaptativa ao facilitar a apresentação de antigénios exógenos mediada pelo MHC de classe II; promove a geração de péptidos antigénicos no compartimento endossomal/lisossomal. Referências relacionadas: PMID:15894275, PMID:20518820
• Durante a infeção pelo vírus da papeira, a LAMP2 apoia a clivagem mediada pela FURIN da proteína de fusão viral F ao interagir tanto com a FURIN como com a proteína viral não processada.
• A LAMP2 localiza-se principalmente na membrana dos lisossomas e, em menor grau, nos endossomas, autofagossomas e na membrana plasmática.
• Expressão tecidular específica das isoformas: a LAMP-2A é abundante na placenta, nos pulmões e no fígado; a LAMP-2B é amplamente expressa em tecidos, incluindo o baço, o timo, a próstata e os testículos; a LAMP-2C é encontrada no intestino delgado, cólon, coração, cérebro e músculo esquelético. Referências relacionadas: PMID:26856698, PMID:7488019

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde ao domínio luminal (aminoácidos 29–375) da LAMP2 humana, visando um epítopo extracelular acessível em amostras não permeabilizadas para marcação de superfície (por exemplo, FC) e em amostras permeabilizadas para deteção total.
• Para Western blot, o peso previsto da proteína central é de 45 kDa, mas a extensa glicosilação ligada a N e O normalmente resulta numa banda ampla que migra a aproximadamente 90–110 kDa; utilize um controlo positivo adequado, como lisado de células inteiras HeLa ou HepG2.
• Em imunofluorescência e IHC, as condições de fixação/permeabilização devem ser otimizadas para permitir o acesso ao compartimento da membrana lisossomal; considere a co-marcação com marcadores lisossomais (por exemplo, LAMP1) para confirmar a localização.
• Para citometria de fluxo, a marcação intracelular (FC intra) requer a permeabilização das células; a compatibilidade com anticorpos secundários conjugados com fluoróforos e com protocolos de fixação deve ser validada no seu contexto celular específico.
• Este anticorpo foi validado para confirmação de knockout; inclua sempre controlos adequados de knockout ou knockdown para verificar a especificidade do anticorpo no seu ensaio.

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