[Validado por KO] Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-PML para WB, IP, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P29590

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PML

• A proteína PML, também conhecida como TRIM19, é um membro da família de motivos tripartidos (TRIM) e funciona como uma ligase E3 de proteínas SUMO, desempenhando um papel central na montagem de corpos nucleares PML (PML-NBs) e mediando a sumoilização de proteínas alvo.
• O PML inibe a exportação nuclear de mRNA mediada por EIF4E, reduzindo a afinidade do EIF4E pela capa 5' m7G, contribuindo para a sua função de supressor de tumores. Referências relacionadas: PMID:11500381 PMID:11575918 PMID:18391071
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas (por exemplo, PML-1 a PML-14), que exibem localizações subcelulares distintas e especializações funcionais; as isoformas nucleares estão envolvidas na remodelação da cromatina e regulação génica, enquanto as isoformas citoplasmáticas medeiam a sinalização TGF-beta e restringem a replicação viral.
• O PML está predominantemente localizado no núcleo onde forma PML-NBs, mas também pode ser encontrado no nucleoplasma, citoplasma, membrana do retículo endoplasmático e membrana do endossoma precoce, dependendo da isoforma e do contexto celular.
• Modificações pós-traducionais, como sumoilização, acetilação e fosforilação, são críticas para a dinâmica dos PML-NBs e as interações funcionais do PML, influenciando o seu papel na apoptose, ritmo circadiano e respostas antivirais.
• O PML atua como uma ligase E3 de proteínas SUMO, sumoilando substratos virais e celulares para regular a imunidade inata antiviral. Referências relacionadas: PMID:20972456 PMID:28250117
• O PML exibe ampla atividade antiviral contra vírus de DNA e RNA, incluindo o vírus herpes simplex, influenza A, raiva e hepatite C, muitas vezes sequestrando proteínas virais dentro dos PML-NBs e inibindo a replicação viral.
• Como supressor de tumores, o PML regula vias de sinalização chave, modulando a atividade de p53, RB1, AKT, PTEN e mTOR, contribuindo para a supressão do crescimento e senescência.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio corresponde aos aminoácidos 1-185 do PML humano, cobrindo a região N-terminal que inclui os domínios dedo RING e B-box; considere isto ao conceber experiências para detetar isoformas específicas.
• Para o Western blot, espera-se uma banda em ~98 kDa; no entanto, devido a múltiplas isoformas e sumoilização, bandas adicionais podem ser observadas. Valide com controlos apropriados, especialmente ao usar linhagens celulares knockout.
• Na imunofluorescência, o PML mostra tipicamente um padrão de coloração nuclear pontuado característico dos corpos nucleares PML; a colocalização com marcadores como SP100 pode confirmar a especificidade.
• Para imuno-histoquímica, valide em amostras de tecido humano e otimize as condições de recuperação de antigénio para garantir uma coloração nuclear robusta. Note que a expressão do PML pode ser baixa em alguns tecidos normais.
• Este anticorpo foi validado para estudos de knockout; inclua controlos knockout apropriados para confirmar a especificidade no seu sistema de amostras.
• Ao utilizar para imunoprecipitação ou ELISA, considere a reatividade do anticorpo com PML desnaturado versus nativo e potenciais epítopos conformacionais dependentes de SUMO.

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