Anticorpo monoclonal de coelho anti-Von Hippel Lindau/VHL validado por KO para WB, ELISA - P40337

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de Von Hippel Lindau/VHL

• pVHL é um componente de reconhecimento de substratos do complexo ligase de ubiquitina VCB-Cul2 E3, mediando a ubiquitinação dependente de oxigênio de proteínas-alvo para degradação pelo proteassoma.
• Ubiquitina especificamente as subunidades alfa do fator induzível por hipóxia (HIF1A, HIF2A) em condições normóxicas, levando à degradação de HIF e à repressão de genes responsivos à hipóxia. Referências relacionadas: PMID:10944113, PMID:17981124
• VHL também modula a sinalização de mTORC1 ao promover a ubiquitinação e a degradação de RPTOR, além de regular a degradação do receptor adrenérgico ADRB2 de maneira dependente de oxigênio. Referências relacionadas: PMID:19584355, PMID:34290272
• Subcelularmente, VHL está localizada no citoplasma, na membrana celular, no retículo endoplasmático e no núcleo, em consonância com suas funções na degradação de proteínas e no controle transcricional.
• A proteína é expressa no cérebro e nos rins adultos e fetais, com mutações associadas a doenças relacionadas à síndrome de von Hippel-Lindau, eritrocitose congênita e câncer.
• Palavras-chave: Supressor tumoral, iniciação alternativa, splicing alternativo, variante associada a doença.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• Para Western blot, considere utilizar SDS-PAGE redutor e transferir para uma membrana de PVDF ou nitrocelulose. O peso molecular previsto é de aproximadamente 24 kDa; portanto, utilize um gel de 10–12% para obter uma resolução ideal.
• Valide a especificidade do anticorpo utilizando linhagens celulares com knockout de VHL ou amostras submetidas a knockdown mediado por siRNA de células humanas, de camundongo ou de rato, considerando a reatividade cruzada.
• Para ELISA, este anticorpo pode ser utilizado como reagente de captura ou detecção; a combinação com um anticorpo monoclonal de clonagem diferente pode aumentar a sensibilidade em formatos de ELISA sanduíche.
• Otimize a diluição do anticorpo no sistema de ensaio relevante; as diluições iniciais típicas para WB são de 1:500–1:2000, mas recomenda-se uma titulação empírica.

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