[KO Validado] Anticorpo Monoclonal de Coelho contra o Fragmento N-terminal de Gasdermin E clivada para WB, IHC-P, ELISA - O60443

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Gasdermin E

• A Gasdermin E (GSDME), também conhecida como DFNA5 ou ICERE-1, é um membro da família das gasderminas, proteínas formadoras de poros. Ela é expressa como um precursor que é clivado para liberar o fragmento N-terminal ativo, com múltiplas isoformas produzidas por splicing alternativo.
• Após a clivagem pela caspase-3 (CASP3) ou granzima B (GZMB) no Asp270, o fragmento N-terminal transloca para a membrana plasmática, oligomeriza e forma poros com diâmetro interno de 10 a 15 nm, desencadeando a piroptose e a liberação de citocinas inflamatórias como IL-1β e IL-16. Referências relacionadas: PMID:27281216, PMID:28459430, PMID:32188940, PMID:33852854
• A piroptose mediada por GSDME atua como um mecanismo de supressão tumoral: a granzima B liberada por células natural killer (NK) cliva a GSDME nas células tumorais, induzindo a piroptose e uma imunidade antitumoral robusta. Referências relacionadas: PMID:21522185, PMID:32188940, PMID:31953257
• A jusante da via apoptótica mitocondrial e do dano ao DNA, a GSDME pode converter a apoptose em necrose secundária e piroptose, parcialmente via sinalização de p53/TP53. Referências relacionadas: PMID:28045099, PMID:16897187
• A GSDME exibe atividade bactericida e promove a piroptose em resposta a infecções microbianas, incluindo a piroptose placentária induzida pelo vírus Zika que impacta os desfechos fetais. Referências relacionadas: PMID:27281216
• Em termos de localização subcelular, a GSDME de comprimento completo fica principalmente no citoplasma, enquanto o fragmento N-terminal clivado se localiza na membrana celular, onde forma os poros.
• A GSDME é expressa na cóclea e em níveis baixos em muitos tecidos, com maior expressão na placenta. Mutações no gene estão associadas à deficiência auditiva não sindrômica autossômica dominante. Referências relacionadas: PMID:9771715
• Modificações pós-traducionais, incluindo palmitoilação e formação de ligações isopeptídicas, podem regular a ativação da GSDME e sua inserção na membrana.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno do anticorpo é projetado ao redor do sítio de clivagem do Asp270, tornando-o específico para o fragmento N-terminal. Valide a especificidade no seu sistema experimental usando controles positivos e negativos apropriados (ex: amostras não tratadas vs. amostras induzidas com indutores de apoptose/piroptose).
• Para Western blot, são esperadas múltiplas bandas devido ao precursor não clivado (~55 kDa) e aos fragmentos clivados (N-terminal com ~11 kDa e 35 kDa, dependendo da isoforma). Otimize as condições de carregamento e detecção para distinguir essas formas.
• Para IHC-P, realize a recuperação de antígeno e teste uma série de diluições para obter uma coloração ideal. O anticorpo foi validado para amostras humanas; a reatividade cruzada com outras espécies não foi relatada, portanto confirme a reatividade se estiver usando tecidos não humanos.
• Para ELISA, considere o pareamento com um anticorpo específico para o extremo C-terminal em um ELISA sanduíche para quantificar a GSDME clivada. Realize experimentos piloto para estabelecer a sensibilidade e o intervalo dinâmico.
• Em estudos de piroptose, monitore a clivagem como um indicador; combine com ensaios de atividade de caspase-3 ou detecção de granzima B para obter insights mecanísticos.

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