[Validado por KO] Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-ERK2 para WB, IF/ICC, ELISA - P28482

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do ERK2

• ERK2, codificado pelo gene MAPK1, também é conhecido como quinase 1 ativada por mitógeno, quinase 2 regulada por sinal extracelular, isoforma p42 da quinase MAP e MAPK2. É uma quinase serina/treonina essencial para a cascata de transdução de sinal MAPK/ERK, funcionando em conjunto com o ERK1 (MAPK3) em resposta a diversos estímulos.
• ERK2 medeia uma ampla gama de processos celulares, incluindo crescimento celular, adesão, sobrevivência, diferenciação, regulação da transcrição, tradução, rearranjos do citoesqueleto e apoptose, através da fosforilação de mais de 160 substratos identificados. Esses substratos incluem fatores de transcrição (ex.: ATF2, ELK1, FOS), elementos do citoesqueleto, reguladores de apoptose e reguladores da tradução. Referências relacionadas: PMID:35831023
• Além de sua atividade quinase, o ERK2 atua como um repressor transcricional que se liga a uma sequência de consenso de DNA [GC]AAA[GC], reprimindo genes induzidos por interferon gama, como CCL5, IRF7 e STAT1. Esta função repressiva é independente de sua atividade quinase.
• Subcelularmente, o ERK2 localiza-se no citoplasma, citoesqueleto (incluindo fuso, centro organizador de microtúbulos e centrossomo), núcleo, caveolas da membrana e adesões focais, refletindo seu envolvimento em processos celulares dinâmicos.
• ERK2 está sujeito a múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação (crítica para sua ativação), acetilação e conjugação semelhante à ubiquitina, que regulam sua atividade, estabilidade e localização subcelular.
• A quinase fosforila especificamente a PGK1 sob condições hipóxicas, direcionando-a para as mitocôndrias e suprimindo a formação de acetil-CoA a partir do piruvato. Referências relacionadas: PMID:26942675

Orientacão Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo policlonal de coelho foi produzido contra um peptídeo sintético abrangendo os aminoácidos 200–300 do ERK2 humano (NP_002736.3). Os pesquisadores podem considerar verificar a reatividade em seu sistema de amostra específico, especialmente ao usar modelos não humanos, não de camundongo ou não de rato.
• Para aplicações de Western blot (WB), recomenda-se o uso de controles positivos e negativos apropriados, incluindo lisados validados por nocaute, para confirmar a especificidade da banda no peso molecular esperado (~41 kDa).
• Em experimentos de imunofluorescência/ICC, as condições de fixação e permeabilização devem ser otimizadas, pois o ERK2 se desloca entre o citoplasma e o núcleo dependendo do estado de estimulação; o uso de privação de soro e estimulação com fator de crescimento pode ajudar a visualizar a localização dependente da ativação.
• Para ELISA, o emparelhamento com um anticorpo de captura/detecção adequado pode aumentar a sensibilidade; recomenda-se aos usuários otimizar as condições de revestimento e bloqueio para seu analito alvo.
• Como um reagente policlonal, a consistência entre lotes deve ser monitorada; medidas de controle de qualidade de rotina são sugeridas para estudos de longo prazo.

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