[Validado por KO] IRF3 Rabbit mAb - Q14653

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do IRF3

• O IRF3 é um regulador transcricional chave das respostas imunes dependentes de interferons do tipo I (IFN), desempenhando um papel crítico na imunidade inata contra vírus de DNA e RNA. Ele regula a transcrição de genes de IFN do tipo I (IFN-alfa e IFN-beta) e genes estimulados por IFN (ISG) ao se ligar a elementos de resposta estimulados por interferon (ISRE) em seus promotores. Referências relacionadas: PMID:22394562 PMID:24049179 PMID:25636800 PMID:11846977 PMID:16846591 PMID:16979567
• Em células não infectadas, o IRF3 reside no citoplasma em uma forma inativa. Após a infecção viral, RNA de fita dupla (dsRNA) ou sinalização via receptor Toll-like (TLR), ele é fosforilado pelas quinases IKBKE e TBK1, induzindo uma mudança conformacional que leva à dimerização, localização nuclear e associação com CREBBP para formar o complexo fator 1 ativado por dsRNA (DRAF1), que ativa genes de IFN do tipo I e ISG. Referências relacionadas: PMID:22394562 PMID:25636800 PMID:27302953 PMID:16154084 PMID:33440148
• O IRF3 pode ativar programas distintos de expressão gênica em macrófagos e induzir apoptose significativa em macrófagos primários. Em resposta à infecção pelo vírus Sendai, o IRF3 é recrutado por TOMM70:HSP90AA1 para as mitocôndrias, onde forma um complexo de apoptose TOMM70:HSP90AA1:IRF3:BAX, induzindo apoptose. Referências relacionadas: PMID:16846591 PMID:25609812
• O IRF3 é um fator de transcrição chave que regula a resposta ao IFN durante a infecção por SARS-CoV-2. Referências relacionadas: PMID:33440148
• A localização subcelular inclui citoplasma, núcleo e mitocôndria, consistente com sua regulação dinâmica durante a sinalização.
• Modificações pós-traducionais incluem fosforilação (crítica para ativação), acetilação, formação de ponte dissulfeto, ligação de isopeptídeo e conjugação Ubl.
• Expresso constitutivamente em uma variedade de tecidos, destacando seu papel amplo na defesa antiviral.
• O splicing alternativo produz múltiplas isoformas, potencialmente modulando sua função em diferentes contextos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 1-260 do IRF3 humano (NP_001184051.1), cobrindo a região terminal N que inclui domínios de ligação ao DNA e regulatórios. Este design pode detectar formas fosforiladas e não fosforiladas, tornando-o adequado para monitorar os níveis totais de IRF3.
• Para Western blotting, considere o uso de lisados de células estimuladas com mimetizadores virais (por exemplo, poli(I:C)) ou interferons para observar mudanças de banda dependentes de ativação indicativas de fosforilação. Valide no sistema de amostra relevante, como células infectadas por vírus ou ativadas por TLR.
• Em imuno-histoquímica e imunofluorescência, a recuperação de antígeno e métodos de fixação apropriados devem ser otimizados para preservar a conformação nativa do IRF3, especialmente uma vez que ele sofre translocação nuclear dependente de fosforilação.
• Para imunoprecipitação, certifique-se de condições de lise suaves para manter interações proteína-proteína, pois o IRF3 forma complexos com parceiros como CREBBP e TBK1.
• A reatividade do anticorpo com espécies de camundongo e rato (com base na homologia de sequência) permite estudos entre espécies, mas recomenda-se verificar a reatividade no modelo experimental específico.

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