Anticorpo Monoclonal de Coelho MDA5 para WB, ELISA - Q9BYX4

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do MDA5

• Codifica a proteína 1 contendo o domínio C da helicase induzida por interferon (IFIH1), também conhecida como MDA5, Helicard e RLR-2. Trata-se de um receptor de imunidade inata citoplasmático que reconhece RNA viral dupla-fita e mRNA não capado com deficiência de 2'-O-metilação.
• Após a ligação ao ligante, o MDA5 interage com MAVS nas mitocôndrias, desencadeando a fosforilação mediada por TBK1/IKBKE e a ativação de IRF3/IRF7, levando à produção de interferon tipo I e citocinas pró-inflamatórias. Referências relacionadas: PMID:28594402, PMID:32169843, PMID:33727702
• Atua como um sensor principal para picornavírus (por exemplo, EMCV, rinovírus), coronavírus (incluindo o SARS-CoV-2) e outros vírus de RNA como o dengue e o vírus do Nilo Ocidental. Referências relacionadas: PMID:28606988, PMID:33440148, PMID:33514628
• Se localiza no citoplasma, mitocôndrias e núcleo, o que é consistente com seu papel na detecção de RNA viral e transdução de sinal.
• Pertence à família dos receptores do tipo RIG-I (RLR), contendo dois domínios CARD N-terminal, um domínio de helicase DExD/H-box e um domínio regulatório C-terminal. O domínio da helicase se liga ao RNA de maneira dependente de ATP.
• Modificações pós-traducionais incluem fosforilação e ubiquitinação, que regulam sua atividade e estabilidade.
• É amplamente expresso com níveis mais elevados em placenta, pâncreas e baço; com pouca expressão em cérebro, testículo e pulmão.
• Mutações associadas a doenças no IFIH1 estão ligadas à síndrome de Aicardi-Goutières e diabetes mellitus, destacando seu papel na autoimunidade.
• Além disso, o MDA5 pode desempenhar um papel na inibição do crescimento e na apoptose em células tumorais, além de potencializar a função das células assassinas naturais.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange uma região C-terminal (aa 900-1000) do MDA5 humano, que é conservada entre humano, camundongo e rato, suportando a reatividade cruzada reportada. Valide a reatividade específica da espécie em matrizes de amostra relevantes.
• Para Western blotting, o anticorpo pode detectar bandas em ~117 kDa (MDA5 de comprimento total) e possivelmente em ~25 kDa; é aconselhável usar uma ampla faixa de peso molecular e controles positivos, como células HeLa ou A549 tratadas com interferon.
• Em ELISA, titule o anticorpo contra o MDA5 recombinante ou o peptídeo de imunização para determinar as concentrações de trabalho ideais; garanta etapas adequadas de bloqueio e lavagem.
• Como o MDA5 é induzível por interferon, considere estimular as células com IFN-alfa/beta ou mímicos virais (por exemplo, poly(I:C)) para upregular a expressão do alvo antes da lise.

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