Anticorpo Policlonado de Coelho Methyl-HP1 gamma/CBX3 (H175) Q13185 para Dot Blot e ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de CBX3 (HP1 gamma)

CBX3, também conhecido como HP1 gamma, é um componente da heterocromatina que reconhece e se liga a caudas da histona H3 metiladas em Lis-9, levando à repressão epigenética. Ele também se liga à histona H1.4 metilada em Lis-26 (H1.4K26me) e é excluído da cromatina quando H1.4 é simultaneamente metilado e fosforilado. Referências relacionadas: [PMID:11242053] [PMID:16127177]

Por meio da interação com proteínas do complexo MIS12, CBX3 está envolvido na formação de cinetócoros funcionais. Ele contribui para a conversão da cromatina local em um estado repressivo semelhante à heterocromatina por meio da trimetilação de H3 Lis-9 e medeia o recrutamento das metiltransferases SUV39H1/2 pelo complexo PER para genes alvo circadianos como PER2 e PER1. Referências relacionadas: [PMID:15502821]

CBX3 também medeia o recrutamento de NIPBL para locais de danos no DNA em quebras de fita dupla, destacando seu papel no reparo do DNA. Referências relacionadas: [PMID:28167679]

Subcelularmente, CBX3 é uma proteína nuclear que se associa à eucromatina e é amplamente excluída da heterocromatina constitutiva. Ele também pode estar associado a microtúbulos e polos mitóticos durante a mitose. Referências relacionadas: [PMID:28977666]

As modificações pós-traducionais de CBX3 incluem acetilação N-terminal, múltiplas acetilações de lisina e fosforilação em vários resíduos de serina (Ser93, Ser95, Ser97, Ser99, Ser176), que regulam sua função e interações. Referências relacionadas: [PMID:19608861] [PMID:16964243] [PMID:20068231] [PMID:21406692] [PMID:18669648] [PMID:24275569] [PMID:23186163]

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno cobre a região N-terminal (aa 1‑183) da CBX3 humana; considere verificar o reconhecimento do epítopo ao usar mutantes de truncamento ou ensaios específicos de isoforma.
• Para dot blot (DB), otimize o bloqueio e a diluição do anticorpo para minimizar a ligação inespecífica à membrana. Recomenda-se uma titração piloto.
• Para ELISA, certifique-se de que o revestimento do antígeno corresponde ao epítopo metilado de interesse. Valide o ensaio no sistema de amostra relevante (por exemplo, extratos nucleares de linhas celulares humanas).
• Protocolos de extração nuclear devem ser usados para enriquecer CBX3, já que é predominantemente uma proteína nuclear. Evite condições desnaturantes severas que podem alterar o reconhecimento do epítopo específico para metilação.
• Use controles adequados (por exemplo, peptídeos recombinantes de CBX3 metilado vs não metilado) para confirmar a especificidade para a modificação metil-H175.
• Este anticorpo foi testado apenas em amostras humanas; a reatividade cruzada com outras espécies não foi avaliada. Valide na espécie alvo antes do uso.

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