mAb de Coelho contra MonoMetil-Histona H3-K18 (Q16695/P68431) para ChIP & CUT&Tag | WB, IHC-P, IF, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

As histonas são os principais componentes proteicos da cromatina, atuando como eixos ao redor dos quais o DNA se enrola. A histona H3, juntamente com H2A, H2B e H4, forma o núcleo do nucleossomo. Esses nucleossomos compactam o DNA e regulam sua acessibilidade para transcrição, replicação, reparo e estabilidade cromossômica. A cauda N-terminal da histona H3 está sujeita a inúmeras modificações pós-traducionais (PTMs), incluindo metilação, acetilação, fosforilação e outras, que coletivamente constituem o "código da histona" e orquestram a dinâmica da cromatina e a expressão gênica.

A lisina 18 (K18) da histona H3 (correspondente à posição 19 no precursor) é um resíduo chave que pode sofrer monometilação. Essa modificação, juntamente com outras PTMs nesse sítio, influencia a ligação de proteínas efetoras e modula a estrutura da cromatina. Enquanto a acetilação da K18 está frequentemente associada à ativação transcricional, os estados de metilação podem ter efeitos dependentes do contexto. A monometilação da H3K18 está implicada na regulação da expressão gênica e na manutenção da função adequada da cromatina.

Referências relacionadas: PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708.

As entradas SWISS Q16695 (Histona H3.1t) e P68431 (Histona H3.1) representam duas variantes humanas da histona H3. A Q16695 é expressa predominantemente nas células testiculares, onde substitui a H3.1 canônica durante a espermatogênese. A P68431 é uma histona dependente da replicação, expressa em células somáticas e amplamente distribuída. Ambas as variantes se localizam no núcleo e nos cromossomos.

Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O anticorpo foi gerado usando um peptídeo sintético monometilado ao redor da K18. Para garantir a especificidade pela forma monometilada, considere realizar um ensaio de competição com peptídeo usando os peptídeos não modificados ou di-/trimetilados correspondentes durante a validação inicial.
• Para Western blot (WB), extratos de histonas de células humanas, de camundongo ou de rato são recomendados como material inicial. Espera-se uma banda específica em torno de 15 kDa. Execute controles apropriados, incluindo anticorpo contra H3 total, para confirmar a carga igual.
• Em experimentos de imunoprecipitação da cromatina (ChIP) e CUT&Tag, a titulação do anticorpo é crítica. É recomendável incluir regiões genômicas de controle positivo conhecidas por abrigar monometilação em H3K18 (se disponíveis) e loci de controle negativo. As condições de reticulação podem influenciar a acessibilidade do epítopo; considere tanto protocolos de ChIP nativos quanto reticulados.
• Para imunohistoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), as condições de recuperação de antígeno podem precisar de otimização. Recomenda-se o uso de amostras de tecido ou celular com níveis documentados de H3K18me1 para estabelecer a especificidade da coloração.
• As aplicações de ELISA e dot blot (DB) podem ser usadas para verificações rápidas do título e da especificidade do anticorpo contra vários peptídeos em diferentes estados de metilação.

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