mAb de Coelho contra MonoMetil-Histona H3-K36 (Q16695/P68431) para WB, DB, IHC-P, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A histona H3 é um componente central do nucleossomo, que envolve e compacta o DNA em cromatina. Essa compactação limita a acessibilidade do DNA às maquinarias celulares que precisam do DNA como molde. Consequentemente, as histonas desempenham um papel central na regulação da transcrição, reparo do DNA, replicação do DNA e estabilidade cromossômica. A acessibilidade do DNA é regulada por um conjunto complexo de modificações pós-traducionais das histonas, coletivamente conhecidas como código das histonas, e pela remodelação do nucleossomo. Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Vários genes codificam variantes da histona H3. As observações e apelidos do produto incluem H3C2, H3C3, H3C4, H3C6, H3C7, H3C8, H3C10, H3C11, H3C12 e HIST1H3A, refletindo os vários genes da histona H3.1 dependentes de replicação. Além disso, a variante específica de testículo H3.1t (H3t, codificada por H3-4 / HIST3H3) é representada pela acessão SWISS Q16695. Essas variantes são altamente semelhantes em sequência. Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Subcelularmente, a histona H3 está localizada no núcleo e é um componente principal dos cromossomos. Sua presença é ubíqua nos nucleossomos de todo o genoma. Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Modificações pós-traducionais da histona H3, incluindo metilação, acetilação, fosforilação e outras, ajustam a estrutura e a função da cromatina. A monometilação na lisina 36 (K36) é uma dessas modificações. Este anticorpo detecta especificamente a forma monometilada de K36 e foi gerado usando um peptídeo sintético monometilado como imunógeno direcionado a esse resíduo. Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O peso proteico previsto da histona H3 é de aproximadamente 15 kDa. No entanto, devido à sua natureza altamente básica, a histona H3 geralmente migra com um peso molecular aparente ligeiramente maior em SDS-PAGE. Verifique o padrão de migração específico no seu sistema de amostras.
• Este anticorpo foi produzido contra um peptídeo sintético monometilado ao redor de K36. Espera-se que ele reconheça especificamente a forma monometilada, em detrimento de estados não modificados ou outros estados de metilação. Confirme a especificidade usando ensaios de competição com peptídeos ou comparando os sinais de lisados celulares tratados com agentes modificadores da metilação.
• Para Western blot (WB) e dot blot (DB), considere o uso de protocolos de extração de histonas que enriquecem proteínas nucleares para melhorar a sensibilidade da detecção.
• Na imuno-histoquímica (IHC-P), as condições de recuperação de antígeno (por exemplo, tampão de citrato pH 6,0 ou tampão de EDTA pH 9,0) podem precisar ser otimizadas. Inclua tecidos de controle positivo e negativo conhecidos para avaliar a especificidade da coloração.
• O ELISA pode ser usado para triagem de alto rendimento ou experimentos de titulação. Combine este anticorpo com um anticorpo secundário anti-coelho adequado conjugado a HRP ou outra enzima repórter para a detecção.

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