Anticorpo monoclonal de coelho MonoMetil-Histona H3-K4 (Q16695/P68431) para WB, ChIP, IF/ICC e pesquisa epigenética

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A Histona H3 é um componente central do nucleossomo, que envolve e compacta o DNA em cromatina. Essa compactação limita a acessibilidade do DNA à maquinaria celular que necessita do DNA como molde, desempenhando assim um papel central na regulação da transcrição, reparo do DNA, replicação do DNA e estabilidade cromossômica. A acessibilidade do DNA é finamente ajustada por meio de um conjunto complexo de modificações pós-traducionais nas histonas, conhecido como código das histonas, e pela remodelação do nucleossomo.

A Histona H3 se localiza no núcleo e é parte integrante dos cromossomos. Duas variantes são relevantes aqui: a histona H3.1 canônica (codificada por múltiplos genes como H3C1, H3C2, etc., SWISS P68431) é expressa de forma ubíqua, enquanto a histona H3.1t (SWISS Q16695) é específica do testículo. Ambas compartilham o mesmo papel fundamental na estrutura da cromatina.

A lisina 4 da histona H3 (H3K4) é um sítio principal para diversas modificações pós-traducionais, incluindo mono-, di- e trimetilação, acetilação e outras. A monometilação de H3K4 (H3K4me1) está tipicamente associada a regiões reguladoras enhancers e à transcrição gênica ativa. Este anticorpo foi desenvolvido contra um peptídeo monometilado ao redor de H3K4, fornecendo especificidade para esse estado de modificação.

Referências relacionadas: PMID:16267050, PMID:16457588, PMID:17194708.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo é específico para H3K4 monometilado. Para resultados ideais, inclua amostras de controle positivo e negativo (por exemplo, peptídeos com K4 não modificado, mono-, di- ou trimetilado) para confirmar a especificidade.
• Western Blot (WB): Use extratos nucleares ou lisados celulares totais. É esperada uma banda de aproximadamente 16 kDa. Determine empiricamente a diluição ideal do anticorpo primário (por exemplo, faixa inicial de 1:500–1:2000) e use com um anticorpo secundário conjugado a HRP apropriado.
• Imunoprecipitação da Cromatina (ChIP): Adequado para ChIP. Realize a reticulação da cromatina, clivagem e imunoprecipitação com o anticorpo. Valide o enriquecimento por qPCR em loci alvo conhecidos de H3K4me1.
• Imunofluorescência (IF/ICC): Fixe e permeabilize as células adequadamente. É esperada coloração nuclear exclusiva. Realize a contracoloração com DAPI ou similar para confirmar a localização.
• IHC-P: A recuperação de antígeno pode ser necessária; otimize as condições para cada tipo de tecido.
• Dot Blot (DB) e ELISA: Garanta que a concentração do peptídeo e as condições de bloqueio estejam otimizadas para minimizar a ligação não específica.
• Reatividade cruzada: Este anticorpo reconhece uma ampla gama de espécies, incluindo plantas (Arabidopsis, arroz, trigo). Para amostras de plantas, ajuste os protocolos de extração devido à parede celular rígida e otimize as condições de detecção.

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