Anticorpo policlonal de coelho para MonoMetil-Histona H3-K79 (Q16695 / P68431) para WB, ELISA, ChIP

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da MonoMetil-Histona H3

• A histona H3 é um componente central do nucleossomo, que envolve e compacta o DNA em cromatina. Essa compactação restringe a acessibilidade ao DNA, regulando assim processos nucleares fundamentais, incluindo transcrição, reparo do DNA, replicação e estabilidade cromossômica.
• Como peça central do "código das histonas", a H3 sofre inúmeras modificações pós-traducionais específicas por sítio (MPTs) — como metilação, acetilação, fosforilação e citrulinação — que ajustam finamente a estrutura da cromatina e a expressão gênica. A monometilação na lisina 79 (K79me1) representa uma dessas marcas reguladoras implicadas no controle transcricional e na memória epigenética.
• A histona H3 localiza-se principalmente no núcleo e é um componente integrante dos cromossomos. Existem várias variantes da H3 em humanos: a H3.1 canônica dependente de replicação (codificada por vários genes HIST1H3 e P68431) e a H3.1t específica de testículo (Q16695), que é expressa seletivamente nas células testiculares.
• A função precisa da monometilação de K79 é dependente do contexto; ela tem sido associada tanto a ambientes de cromatina ativa quanto reprimida, e sua regulação aberrante está ligada a distúrbios do desenvolvimento e cânceres.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Desenho do imunógeno: O anticorpo foi desenvolvido contra um peptídeo monometilado sintético correspondente aos resíduos ao redor da K79 da histona H3 humana (NP_003520.1), garantindo especificidade para a marca K79me1.
• Western blotting (WB): Para detecção, considere usar extratos de proteínas nucleares ou histonas extraídas em meio ácido. Dado o peso molecular previsto de aproximadamente 15 kDa, protocolos padrão de SDS-PAGE e transferência são adequados. Teste uma faixa de diluições do anticorpo para otimizar a relação sinal-ruído.
• ELISA: Use peptídeos monometilados sintéticos e tampões de bloqueio adequados para minimizar a ligação não específica. Inclua peptídeos não modificados e outros peptídeos modificados como controles para confirmar a especificidade.
• Imunoprecipitação da cromatina (ChIP): As condições de reticulação e a sonicação devem ser cuidadosamente otimizadas para preservar a marca de metilação e obter a fragmentação adequada da cromatina. Valide o desempenho do anticorpo na espécie relevante (humano, camundongo, rato) e no contexto celular estudado.
• Reatividade cruzada: Prevê-se que o anticorpo reaja com uma ampla gama de espécies devido à alta conservação da sequência da região H3K79. Valide a especificidade no seu sistema experimental usando controles positivos e negativos adequados.

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