Anticorpo Policlonal de Coelho MonoMetil-Histona H3-K79 (Q16695/P68431) para WB, IHC, ChIP

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A histona H3 é um componente central do nucleossomo, a unidade repetitiva fundamental da cromatina. Junto com H2A, H2B e H4, ela empacota o DNA genômico em estruturas compactas, regulando assim o acesso para processos baseados em DNA, como transcrição, replicação, reparo e estabilidade cromossômica. A modulação dinâmica da arquitetura da cromatina é alcançada através de um complexo conjunto de modificações pós-traducionais nas caudas e domínios globulares das histonas, coletivamente referidas como "código das histonas". Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

A histona H3 localiza-se principalmente no núcleo e está associada aos cromossomos durante todo o ciclo celular. Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Embora as variantes canônicas da histona H3 sejam expressas de forma ubíqua, certas isoformas da histona H3 exibem padrões específicos de tecido. Por exemplo, a histona H3.1t (H3t), codificada por H3-4 (HIST3H3), é predominantemente expressa em células testiculares. Referências relacionadas: UniProt Q16695

A histona H3 sofre extensas modificações pós-traducionais, incluindo metilação, acetilação, fosforilação, citrulinização e outras, em vários resíduos. Entre estas, a metilação na lisina 79 (K79) é uma marca epigenética conservada, com estados de mono-, di- e tri-metilação cada um associado a funções cromatínicas distintas. Este anticorpo policlonal foi desenvolvido usando um peptídeo sintético monometilado em torno da K79 para detectar especificamente a modificação K79me1.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno foi projetado como um peptídeo sintético correspondente à região ao redor da lisina 79 da histona H3 humana, contendo um grupo monometil na K79. Isto garante reatividade específica para a forma monometilada; a reatividade cruzada com formas não metiladas ou estados de metilação mais elevados deve ser avaliada no contexto experimental.
• Para Western blotting (WB), considere usar histonas extraídas com ácido ou frações nucleares enriquecidas em cromatina para melhorar a detecção, com migração proteica típica observada em ~15 kDa.
• Em imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), valide o anticorpo sob condições apropriadas de fixação e recuperação de antígeno para o tecido ou tipo celular de interesse.
• Para imunoprecipitação da cromatina (ChIP) e sequenciamento de ChIP (ChIP-seq), otimize a fragmentação e a quantidade de anticorpo para a entrada de cromatina específica; a inclusão de loci genômicos positivos e negativos para H3K79me1 é recomendada.
• Em ensaios baseados em ELISA, o anticorpo pode ser empregado para confirmar a especificidade do peptídeo; valide o desempenho com um painel de peptídeos metilados e não metilados.

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