Anticorpo Monoclonal de Coelho MonoMetil-Histona H3-K9 | Q16695 / P68431 – Anticorpo Específico para Metilação para WB, ChIP, ELISA e Mais

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A histona H3 é um componente central do nucleossomo, a unidade repetitiva fundamental da cromatina. Ela desempenha um papel central na compactação do DNA e na regulação de sua acessibilidade às maquinarias de transcrição, replicação e reparo.

Uma característica chave da biologia da histona H3 é a hipótese do "código das histonas" — combinações específicas de modificações pós-traducionais (PTMs) em sua cauda N-terminal flexível governam estados distintos da cromatina e processos nucleares subsequentes. Entre essas PTMs, a metilação na lisina 9 (H3K9me) é uma das marcas mais intensamente estudadas, frequentemente associada à repressão transcricional, formação de heterocromatina e estabilidade genômica.

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A lisina na posição 9 da proteína H3 madura (correspondente à posição 10 da UniProt) pode ser encontrada em diferentes estados de metilação — mono-, di- ou tri‑metilada — cada um com resultados biológicos distintos. A H3K9 monometilada (H3K9me1) é primariamente enriquecida em promotores e intensificadores de genes ativos em regiões eucromáticas, onde ajusta finamente a atividade transcricional, embora também tenha sido detectada em heterocromatina pericêntrica em contextos celulares específicos.

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A histona H3 existe como múltiplas variantes codificadas por genes diferentes. A H3.1 canônica (SWISS P68431) é expressa de maneira dependente da replicação e é incorporada à cromatina durante a fase S, enquanto a variante específica do testículo H3.1t/H3‑4 (Q16695) é expressa apenas em células testiculares e pode contribuir para a dinâmica da cromatina específica da espermatogênese. O epítopo deste anticorpo abrange uma região altamente conservada entre as variantes de H3, permitindo uma detecção ampla.

Referências relacionadas: Nenhuma (especificidade de tecido baseada em registros de sequência)

Subcelularmente, a histona H3 está localizada no núcleo e fortemente associada ao DNA cromossômico.

Este anticorpo reconhece especificamente a forma monometilada da H3K9. Devido à natureza conservada do local da modificação, prevê-se que reaja com múltiplas espécies e subtipos de H3.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Preparação de amostra para WB: Considere usar histonas extraídas com ácido ou lisados enriquecidos com núcleo para melhorar a relação sinal-ruído. Para lisados celulares totais, inclua coquetéis apropriados de inibidores de protease e evite condições de desnaturação que possam remover modificações de histonas.
• Validação de especificidade: Em qualquer ensaio, confirme a especificidade do anticorpo usando peptídeos sintéticos K9 monometilados versus não metilados em um experimento de competição de peptídeos (dot blot ou ELISA). Um array de proteína de histona H3 recombinante com estados de metilação definidos também pode servir como um controle rigoroso.
• Otimização de ChIP: Para imunoprecipitação da cromatina, o tempo de ligação cruzada, a quantidade de anticorpo e as condições de sonicação devem ser determinados empiricamente. A alta avidez do anticorpo pela marca monometil pode exigir menos anticorpo por reação em comparação com anticorpos pan-H3. Sempre inclua um controle de bloqueio com peptídeo específico para monometil.
• Considerações de IHC e IF: A fixação e a recuperação de antígeno podem influenciar a acessibilidade do epítopo. Para IHC-P, protocolos padrão de tecido incluído em parafina fixado em formalina (FFPE) com uma etapa de recuperação de antígeno mediada por calor (tampão citrato, pH 6.0) geralmente funcionam bem; no entanto, testes preliminares são aconselhados. Na imunofluorescência, uma breve permeabilização com metanol pode melhorar a coloração nuclear.
• Aplicações de ELISA/dot blot: Revestir placas com peptídeo H3(1‑21) monometilado ou H3K9me1 recombinante de comprimento total para avaliar a afinidade de ligação e a linearidade. Use peptídeo conjugado a BSA como uma alternativa.
• Reatividade cruzada de espécies: Embora uma ampla reatividade seja prevista, recomendamos validar o anticorpo em seu sistema de amostra específico (por exemplo, camundongo, rato ou outra espécie relevante) antes de experimentos em larga escala.

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