Anticorpo Monoclonal de Coelho MonoMethyl-Histone H3-K9 (Q16695/P68431) para WB, IHC, ChIP, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A histona H3 é um componente central do nucleossomo, a unidade fundamental repetitiva da cromatina. Os nucleossomos enrolam e compactam o DNA, regulando assim o acesso para transcrição, replicação e reparo. Tanto a histona H3.1 canônica dependente de replicação (UniProt P68431) quanto a variante específica do testículo H3.1t (UniProt Q16695) compartilham caudas N-terminais altamente conservadas, onde ocorrem modificações regulatórias chave.

A cauda N-terminal da histona H3 está sujeita a uma diversa gama de modificações pós-traducionais (PTMs), incluindo metilação, acetilação, fosforilação, citrulinização, entre outras. Essas modificações constituem o "código de histonas", governando a estrutura da cromatina e a expressão gênica. A metilação da lisina 9 (K9; correspondente à posição 10 no precursor completo) é uma marca epigenética crítica. A H3K9 monometilada (H3K9me1) está associada ao silenciamento transcricional e à formação de heterocromatina, e pode servir como substrato para maior metilação por metiltransferases específicas.

Este anticorpo monoclonal de coelho foi gerado contra um peptídeo monometilado sintético em torno de K9 da histona H3.1 humana (P68431), permitindo a detecção específica de H3K9me1. Ele não reconhece as formas não metiladas ou metiladas de forma diferente (por exemplo, H3K9me2/me3), conforme confirmado pelo design do imunógeno.

Localização subcelular: A histona H3 é predominantemente nuclear e associada aos cromossomos. Especificidade tecidual: As variantes canônicas H3.1 são expressas na maioria das células em divisão, enquanto a variante H3.1t (Q16695) é expressa especificamente em células testiculares.

Referências relacionadas: PMID:11242053; PMID:16267050; PMID:17194708.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo monometilado sintético em torno de K9; a especificidade para H3K9me1 deve ser verificada usando ensaios de competição de peptídeos com peptídeos K9 não modificados, mono-, di- e trimetilados como controles negativos e positivos.
• No Western blot (WB) e dot blot (DB), espera-se uma banda/spot em aproximadamente 16 kDa. Certifique-se da extração adequada de histonas e da normalização do carregamento com anticorpo de H3 total.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), otimize as condições de recuperação de antígeno e bloqueio para cada tipo de tecido/célula para obter coloração nuclear específica.
• A imunoprecipitação de cromatina (ChIP) usando este anticorpo pode mapear as distribuições genômicas de H3K9me1; o cross-linking e a quantidade de anticorpo requerem otimização empírica. Considere ChIP sequencial para confirmar a especificidade da monometilação.
• Prevê-se que o anticorpo reaja cruzadamente com uma ampla gama de espécies devido à alta conservação da sequência da extremidade N da H3; a validação no sistema de amostra relevante (por exemplo, camundongo, rato) é recomendada.
• No ELISA, o anticorpo pode servir como reagente de captura ou detecção para quantificar H3K9me1 em histonas extraídas ou nucleossomos.

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