Anticorpo policlonal de coelho para MonoMetil-Histona H3-R2 (Q16695/P68431) | WB, IF/ICC, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3 (H3.1/H3.1t)

• A histona H3 é um componente central do nucleossomo, que envolve e compacta o DNA na cromatina. Isso limita a acessibilidade do DNA e desempenha um papel central na regulação da transcrição, reparo do DNA, replicação do DNA e estabilidade cromossômica. A acessibilidade do DNA é controlada pelo "código das histonas" — um conjunto complexo de modificações pós-traducionais (MPT) e remodelação do nucleossomo.
• A proteína se localiza no núcleo e nos cromossomos.
• Duas isoformas principais são relevantes: H3.1 (codificado por múltiplos genes, por exemplo, H3C1, H3C2, etc., UniProt P68431) é expresso na maioria das células somáticas, enquanto H3.1t (H3-4, HIST3H3, UniProt Q16695) é específico do testículo.
• A cauda N-terminal da histona H3 está sujeita a inúmeras MPT, incluindo acetilação, metilação, fosforilação, citrulinação e outras. Especificamente, a arginina 2 (R2) pode ser metilada. A dimetilação assimétrica nesse sítio é catalisada pela PRMT6 e está associada à regulação transcricional. A monometilação em R2 é uma etapa intermediária e pode ter papéis funcionais distintos. Este anticorpo reconhece especificamente a forma monometilada de R2. Referências relacionadas: PMID:17898714, PMID:18077460, PMID:18079182

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo monometilado sintético ao redor do R2 da histona H3 humana. Ao realizar western blot (WB), considere usar extratos nucleares ou preparações enriquecidas em histonas para aumentar o sinal. O peso molecular previsto é de ~15 kDa, mas as bandas podem aparecer um pouco mais altas devido a MPT ou interações proteicas.
• Para imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC), as condições de fixação e permeabilização podem precisar de otimização. Como a histona H3 é nuclear, recomenda-se a permeabilização com Triton X-100 ou metanol. Valide o padrão de coloração em comparação com marcadores nucleares conhecidos.
• No ELISA, considere usar um peptídeo metilado como antígeno de revestimento para confirmar a especificidade para o R2 monometilado em comparação com as formas não modificada ou dimetilada.
• A reatividade cruzada entre espécies é prevista como ampla (humano, camundongo, rato e outros), mas é aconselhável verificar a reatividade no sistema de amostra específico de interesse, especialmente para espécies não mamíferas.
• Como anticorpo policlonal de coelho, a consistência entre lotes deve ser avaliada para ensaios quantitativos críticos. A inclusão de controles positivos e negativos apropriados (por exemplo, competição com peptídeo monometilado) pode aumentar a confiabilidade dos dados.

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