Anticorpo pAb de Coelho MonoMetil-Histona H4-K20 (P62805) – Anticorpo de Pesquisa Epigenética para WB, IHC, IF/ICC, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H4

A histona H4 é um componente central do nucleossomo, a unidade básica da cromatina. Junto com as histonas H2A, H2B e H3, ela forma um octâmero ao redor do qual o DNA é enrolado, compactando o genoma dentro do núcleo. Este papel estrutural é fundamental para todos os processos dependentes de DNA, incluindo transcrição, replicação, reparo e segregação cromossômica.

A histona H4 localiza-se principalmente no núcleo e está associada aos cromossomos durante todo o ciclo celular. Durante a espermatogênese, padrões específicos de acetilação podem influenciar sua localização nuclear.

A função e as interações da histona H4 são reguladas dinamicamente por uma vasta gama de modificações pós-traducionais (PTMs), frequentemente referidas como o "código das histonas". Estas incluem acetilação, metilação, fosforilação, citrulinização, ubiquitinação e várias acilações em múltiplos resíduos. Tais marcas alteram a estrutura da cromatina e recrutam proteínas efetoras para modular a expressão gênica, a resposta a danos no DNA e a remodelagem da cromatina.

Entre estas, a metilação da lisina 20 (H4K20) é uma marca epigenética crítica. A monometilação de H4K20 (H4K20me1) está envolvida na ativação transcricional, progressão do ciclo celular e resposta a danos no DNA. O equilíbrio entre os estados de mono-, di- e trimetilação neste local é estritamente controlado por metiltransferases e desmetilases específicas.

Este anticorpo foi produzido contra um peptídeo sintético correspondente à região circundante ao K20 da histona H4 humana, carregando uma modificação monometilada. Ele foi desenhado para reconhecer especificamente apenas a forma monometilada de H4K20, tornando-se uma ferramenta valiosa para dissecar os resultados biológicos distintos dos diferentes estados de metilação de H4K20.

Referências relacionadas: UniProt P62805

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Como a histona H4 é altamente conservada entre os eucariotos, prevê-se que este anticorpo reaja com muitas espécies. No entanto, a reatividade cruzada deve ser verificada empiricamente para sistemas não humanos/camundongos/ratos.
• Para western blotting, enriqueça proteínas de histonas ou use métodos de extração ácida para melhorar a detecção de H4K20me1, pois as histonas podem ser mascaradas por proteínas não histônicas abundantes em lisados celulares totais.
• Em aplicações de dot blot (DB), inclua controles de peptídeos não modificados e monometilados para confirmar a especificidade da modificação.
• Para imuno-histoquímica (IHC), etapas de recuperação de antígeno podem ser necessárias devido à forte associação das histonas com o DNA em tecidos fixados em formol.
• Ao usar imunofluorescência (IF/ICC), realize coloração simultânea com um marcador nuclear para confirmar a localização nuclear esperada.
• Os protocolos de ELISA devem usar peptídeos imobilizados ou extratos de histonas. Certifique-se de que o antígeno de revestimento apresenta o epítopo K20 monometilado para detecção ideal.
• Este anticorpo é específico para monoMetil-K20 e não detecta K20 di- ou trimetilado ou H4 não modificado, com base no design do imunógeno. Ainda assim, valide a especificidade em seu sistema de amostra usando controles negativos apropriados (por exemplo, linhagens celulares com status de metilação H4K20 alterado).

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