PAb de coelho MonoMetil-Histona H4-K5 (P62805) para IF/ICC e ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H4

• Função: A Histona H4 é um componente central do nucleossomo, que envolve e compacta o DNA em cromatina. Isso limita a acessibilidade ao DNA e desempenha um papel central na regulação da transcrição, reparo do DNA, replicação do DNA e estabilidade cromossômica. Os nucleossomos são formados por duas cópias de cada uma das histonas H2A, H2B, H3 e H4, formando um octâmero ao redor do qual 147 pares de bases de DNA são enrolados. O código das histonas, mediado por modificações pós-traducionais, regula a acessibilidade ao DNA e a remodelação dos nucleossomos. Referências relacionadas: UniProtKB P62805

• Localização Subcelular: A Histona H4 está localizada principalmente no núcleo e se associa aos cromossomos. A acetilação pode influenciar sua distribuição subnuclear; por exemplo, a H4 acetilada se localiza no núcleo nas espermátides do estágio 11. Referências relacionadas: UniProtKB P62805

• Modificações Pós-Traducionais: A Histona H4 sofre extensas modificações pós-traducionais, especialmente em sua cauda N-terminal. A acetilação ocorre em múltiplas lisinas (ex.: K6, K9, K13, K17, K32, K92; ver PMID:19608861). A metilação é encontrada na arginina 4 (dimetilação assimétrica pela PRMT1; PMID:11387442) e na lisina 21 (monometilação; PMID:12086618). A monometilação na lisina 5 (K5me1) é uma marca epigenética específica reconhecida por várias proteínas leitoras e está implicada na regulação da transcrição. Outras modificações incluem fosforilação, citrulinação e ubiquitinação, formando coletivamente um código regulatório complexo. Referências relacionadas: PMID:19608861, PMID:11387442, PMID:12086618

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Design do Imunógeno: Este anticorpo foi produzido contra um peptídeo sintético correspondente à região N-terminal da Histona H4 humana monometilada em K5. Ao projetar anticorpos semelhantes, certifique-se que o peptídeo é de alta pureza e que a modificação é confirmada por espectrometria de massa. Considere usar um peptídeo não metilado como controle negativo em seus ensaios para verificar a especificidade.
• IF/ICC: Para imunofluorescência, a fixação padrão com paraformaldeído a 4% e permeabilização com 0,1-0,5% de Triton X-100 é geralmente adequada. Bloqueie a ligação inespecífica com BSA a 5% ou soro. A acessibilidade do epítopo pode variar; pode ser considerada a otimização da recuperação de antígeno. Como as histonas são proteínas nucleares, é esperada coloração nuclear. Inclua controles sem anticorpo primário para avaliar o ruído de fundo.
• ELISA: Para a cobertura do poço, dilua o anticorpo ou antígeno em tampão carbonato/bicarbonato (pH 9,6). Titule a concentração do anticorpo para determinar a relação sinal-ruído ideal. Use o peptídeo monometilado como controle positivo e o peptídeo não modificado como controle negativo para confirmar a especificidade.
• Informações Gerais: Como acontece com qualquer anticorpo específico para modificações, pode ocorrer variação entre lotes; valide novos lotes em seu sistema experimental específico. A reatividade cruzada é prevista para humano, camundongo e rato com base na conservação da sequência; teste na sua espécie de interesse.

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