Anticorpo pAb de Coelho MonoMethyl-Histona H4-R3 (P62805) | Anticorpo Pronto para IF/ICC, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H4

A Histona H4 é uma das proteínas histonas centrais que, junto com H2A, H2B e H3, forma o nucleossomo — a unidade fundamental repetitiva da cromatina. Cada nucleossomo consiste em 147 pares de bases de DNA enrolados em um octâmero de duas cópias de cada uma das quatro histonas centrais. Esta estrutura compacta o DNA genômico, mas também serve como uma plataforma dinâmica para regular a acessibilidade do DNA. A Histona H4 desempenha um papel central na regulação da transcrição, reparo de DNA, replicação de DNA e estabilidade cromossômica. Esses processos são estritamente controlados por uma vasta gama de modificações pós-traducionais nas caudas das histonas, coletivamente referidas como o "código das histonas", que orquestram o remodelamento do nucleossomo e o recrutamento de proteínas efetoras.

A Histona H4 é predominantemente localizada no núcleo, onde se associa aos cromossomos durante todo o ciclo celular. Durante a espermatogênese, a H4 acetilada mostra padrões específicos de localização nuclear em espermátides em alongamento.

A cauda N-terminal da Histona H4 está sujeita a uma grande variedade de modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, metilação, fosforilação, citrulinização e muitas outras. A metilação de resíduos de arginina é uma marca regulatória chave. A Monometilação na arginina 3 (H4R3me1) é catalisada por proteinas arginina metiltransferases e tem sido implicada na regulação transcricional e no estabelecimento de estados de cromatina.

Referências relacionadas: PMID:11387442, PMID:11448779, PMID:15345777

Dada a sua alta conservação entre espécies, a sequência da Histona H4 e os padrões de modificação são amplamente preservados de leveduras a humanos, apoiando a ampla reatividade cruzada deste anticorpo.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Como este anticorpo foi produzido contra um peptídeo sintético monometilado correspondente aos resíduos ao redor de R3 da Histona H4 humana, espera-se que reconheça especificamente a forma monometilada de H4R3. Os pesquisadores devem considerar validar a especificidade usando ensaios de competição com peptídeos ou com linhagens celulares tratadas com inibidores de metiltransferases.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), a fixação padrão com paraformaldeído a 4% seguida de permeabilização com Triton X-100 a 0,1–0,5% é tipicamente compatível com a detecção de histonas. A contracoloração nuclear (por exemplo, DAPI) é recomendada para confirmar a localização nuclear do sinal.
• Em aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser usado para detectar peptídeos sintéticos monometilados de H4R3 ou extratos de histonas de células. Considere otimizar o tampão de revestimento e a diluição do anticorpo para o seu sistema de ensaio específico.
• O anticorpo tem reatividade cruzada prevista com a Histona H4 de humano, camundongo e rato, bem como uma ampla gama de outras espécies devido à alta conservação da sequência. No entanto, a reatividade cruzada deve ser validada experimentalmente no sistema de amostra relevante.

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