Anticorpo Policlonado de Coelho para MonoMetil-Histona H4-R3 | P62805 | WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H4

A Histona H4 é um componente central do nucleossomo, ao redor do qual aproximadamente 147 pares de bases do DNA genômico são enrolados. Como parte do octâmero de histonas, desempenha papéis essenciais na regulação da transcrição, replicação do DNA, reparo e estabilidade cromossômica. A modificação pós-tradicional dinâmica das histonas, denominada coletivamente de "código das histonas", governa a estrutura da cromatina e a expressão gênica. Referências relacionadas: UniProt P62805

A Histona H4 é predominantemente nuclear e se associa aos cromossomos durante todo o ciclo celular. A H4 acetilada foi observada especificamente no núcleo de espermátides da etapa 11, indicando um papel na compactação da cromatina durante a espermatogênese. Referências relacionadas: UniProt P62805

A cauda N-terminal da histona H4 está sujeita a extensas modificações pós-tradicionais, incluindo acetilação, metilação, fosforilação, citrulinagem e vários eventos de acilação. A arginina 3 (R3; correspondente a R4 na proteína processada após a remoção da metionina iniciadora) é um resíduo chave que pode ser monometilado, dimetilado assimetricamente (pela PRMT1), dimetilado simetricamente (pela PRMT5/PRMT7) ou convertido em citrulina. O presente anticorpo reconhece especificamente a forma monometilada da histona H4 na arginina 3. Referências relacionadas: PMID:11387442, PMID:11448779, PMID:15345777, PMID:16567635

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Desenho do imunógeno: O anticorpo foi gerado contra um peptídeo monometilado sintético correspondente à arginina 3 da histona H4 humana (NP_003529.1). Ao avaliar a especificidade, considere ensaios de competição com peptídeos ou dot blots com peptídeos modificados diferentemente para confirmar o reconhecimento seletivo da monometilação em relação à arginina 3 não modificada ou dimetilada.
• Western blotting (WB): A Histona H4 tem um peso molecular previsto de ~11 kDa; são recomendados géis de SDS-PAGE de alta porcentagem (15% ou gradiente) para uma resolução ideal. Extratos nucleares ou histonas extraídas com ácido geralmente produzem sinais mais fortes. Devido ao pequeno tamanho, verifique a eficiência de transferência e use membranas adequadas (por exemplo, PVDF de 0,2 µm).
• Imunohistoquímica (IHC-P) e imunocitoquímica/imunofluorescência (IF/ICC): É esperado um padrão de coloração predominantemente nuclear. A recuperação de antígeno (por exemplo, tampão de citrato, pH 6,0) para seções embebidas em parafina e a permeabilização com detergente para células devem ser otimizadas. A reação cruzada do anticorpo com tecidos de camundongo e rato o torna adequado para estudar modificações de histonas em diversos sistemas modelo.
• ELISA: O peptídeo monometilado pode ser usado como antígeno de revestimento para ELISA direto ou competitivo para quantificar a afinidade de ligação e a especificidade do anticorpo. Os fatores de diluição devem ser titulados com base no formato do ensaio.
• Reatividade cruzada entre espécies: O anticorpo reconhece a histona H4 humana, de camundongo e de rato, e prevê-se que atue em uma ampla gama de outras espécies devido à extrema conservação da sequência da histona H4. Para espécies não testadas, verifique a homologia da sequência do peptídeo na região do imunógeno.
• Considerações sobre anticorpos policlonais: Como um anticorpo policlonal de coelho, pode ocorrer variabilidade entre lotes no título e no fundo. Inclua controles positivos e negativos adequados e revalide cada novo lote nas suas condições experimentais.

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