Anticorpo Policlonico de Coelho MonoMetil-YAP1-K342 (P46937) para WB e ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do YAP1

• YAP1 (proteína associada a Yes 1) funciona como um coativador transcripcional e corepressor, atuando como um efetor downstream fundamental da via de sinalização Hippo. Esta via regula criticamente o tamanho dos órgãos e suprime a tumorigênese ao restringir a proliferação celular e promover a apoptose (PMID:17974916, PMID:18280240, PMID:18579750, PMID:21364637, PMID:30447097). Referências relacionadas: PMID:17974916, PMID:18280240, PMID:18579750, PMID:21364637, PMID:30447097.
• A fosforilação pelas quinases LATS1/2 sequestra YAP1 no citoplasma, impedindo sua translocação nuclear e a subsequente ativação da transcrição dependente de TEAD. Essa regulação dependente de fosforilação é central para seu papel no controle do crescimento celular, crescimento independente de ancoragem e transição epitelial-mesenquimal (EMT) (PMID:18158288, PMID:26598551, PMID:34404733). Referências relacionadas: PMID:18158288, PMID:26598551, PMID:34404733.
• YAP1 está sujeito a extensas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação em múltiplos resíduos de serina, treonina e tirosina, além de ubiquitinação e metilação. A metilação da lisina 342 (K342) é a modificação específica que este anticorpo reconhece. Embora não seja extensivamente caracterizada no UniProt, a metilação neste local pode influenciar as interações ou a estabilidade de YAP1, adicionando outra camada de regulação da via Hippo.
• A localização subcelular de YAP1 é regulada dinamicamente; ele se localiza predominantemente no núcleo em baixa densidade celular e transloca para o citoplasma em alta densidade celular, um processo modulado por fosforilação. YAP1 também se associa a junções apertadas e à membrana celular em resposta a estímulos mecânicos (PMID:18158288, PMID:20048001, PMID:31835537, PMID:25849865). Referências relacionadas: PMID:18158288, PMID:20048001, PMID:31835537, PMID:25849865.
• A análise de expressão tecidual específica revela níveis aumentados de YAP1 em certos cânceres de fígado e próstata, destacando seu potencial oncogênico. Além disso, isoformas sem o domínio de transativação são detectadas em neurônios estriados de pacientes com doença de Huntington (PMID:16461361, PMID:17974916, PMID:7782338). Referências relacionadas: PMID:16461361, PMID:17974916, PMID:7782338.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi desenvolvido contra um peptídeo sintético monometilado correspondente aos resíduos ao redor do K342 do YAP1 humano, o que o torna específico para a forma metilada. Para detecção ideal em WB, considere usar protocolos de fracionamento nuclear e citoplasmático para enriquecer YAP1, pois sua localização afeta a abundância.
• Ao realizar ELISA, inclua um controle de peptídeo não metilado para confirmar a especificidade. Uma abordagem de ELISA competitiva com peptídeos metilados e não metilados pode ajudar a validar a especificidade do sinal.
• A reatividade cruzada é prevista para camundongo e rato com base na homologia de sequência; no entanto, valide a reatividade no tecido ou linha celular relevante antes de experimentos em larga escala.
• Para WB, condições padrão de bloqueio e detecção são adequadas; no entanto, se aparecerem bandas inespecíficas, considere otimizar a diluição do anticorpo (ex: 1:500-1:2000) e a composição do tampão de bloqueio.

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