NFKB1 pAb de coelho para WB, IF/ICC, ELISA - P19838

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de NFKB1

• NFKB1 codifica a proteína precursora p105 e sua subunidade p50 processada proteoliticamente (fator nuclear NF-kappa-B p50). Enquanto p105 funciona como um inibidor semelhante a IκB, retendo os dímeros de NF-κB no citoplasma, a geração de p50 permite a ligação ao DNA e a regulação transcricional. Referências relacionadas: PMID:1423592
• A subunidade p50 ativa associa-se a RELA/p65 para formar o heterodímero p65-p50, um potente ativador transcricional que se liga à sequência consenso κB 5'-GGRNNYYCC-3' nos intensificadores dos genes-alvo. Referências relacionadas: PMID:1740106, PMID:7830764
• Os complexos de NF-κB ficam normalmente sequestrados no citoplasma pelos inibidores IκB. A ativação canônica envolve a fosforilação mediada pela quinase IκB (IKK) e a subsequente degradação proteassomal de IκB, liberando o NF-κB para a translocação ao núcleo.
• NF-κB é um fator de transcrição pleiotrópico presente em quase todos os tipos celulares e atua como mediador central das respostas imunes e inflamatórias, bem como da sobrevivência, proliferação e apoptose celular.
• O homodímero p50-p50 funciona como um repressor transcricional, a menos que esteja associado a BCL3, que o converte em um ativador. Assim, a composição do dímero determina a expressão dos genes-alvo.
• NFKB1 localiza-se predominantemente no citoplasma em células em repouso, mas desloca-se para o núcleo após a ativação, de acordo com seu papel como fator responsivo a sinais.
• Modificações pós-traducionais extensas, incluindo fosforilação, acetilação e ubiquitinação, ajustam com precisão a estabilidade, a atividade de ligação ao DNA e a atividade transcricional de NFKB1.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno (aminoácidos 41–365) está localizado no domínio de homologia Rel N-terminal, conservado entre p105 e p50. Na análise por western blot, podem aparecer as bandas da p105 de comprimento total (~105 kDa) e da p50 processada (~50 kDa); confirme a identidade das bandas utilizando extratos celulares e tratamentos apropriados.
• Para imunofluorescência/ICC, NFKB1 é predominantemente citoplasmático em condições basais; a estimulação com TNF-α ou IL-1β pode induzir uma rápida translocação nuclear. Inclua controles não tratados para visualizar a redistribuição subcelular.
• Ao realizar ELISA, considere utilizar a proteína NFKB1 (p50) recombinante e anticorpos de detecção pareados para validar a especificidade e a sensibilidade. Otimize as condições de revestimento e bloqueio de acordo com o formato do ensaio.
• Como se trata de um anticorpo policlonal, a consistência entre lotes deve ser verificada com um lisado de controle positivo padrão ou uma proteína recombinante.

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