Anticorpo Policlonar de Coelho NFKB1 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P19838

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NFKB1

• O gene NFKB1 codifica o precursor p105, que é processado co-traducionalmente pelo proteassomo para gerar a subunidade ativa p50 (PubMed:1423592). Referências relacionadas: PMID:1423592
• A subunidade p50 forma dímeros funcionais de NF-kB ao se associar com outros membros da família Rel, mais notavelmente o heterodímero p65-p50, que atua como um potente ativador transcricional (PubMed:1740106, PubMed:7830764). Referências relacionadas: PMID:1740106, PMID:7830764
• Os dímeros de NF-kB se ligam especificamente à sequência consenso kappa-B de DNA (5'-GGRNNYYCC-3') localizada nas regiões potenciadoras de genes que regulam as respostas imunes, reações de fase aguda, inflamação e sobrevivência celular.
• Em células não estimuladas, o NF-kB é sequestrado no citoplasma pelas proteínas inibidoras I-kB; após ativação por diversos estímulos, o I-kB é fosforilado e degradado, liberando o NF-kB para entrar no núcleo e regular a expressão dos genes alvo.
• O p105 de comprimento total também funciona como um inibidor semelhante ao I-kB, retendo proteínas associadas de NF-kB no citoplasma e modulando a sinalização MAPK ao reprimir o MAP3K8 até que sua degradação libere o MAP3K8 ativo.
• As principais modificações pós-traducionais do NFKB1 incluem fosforilação, acetilação, ubiquitinação e S-nitrosilação, que ajustam finamente sua atividade transcricional e estabilidade.
• A localização subcelular é principalmente citoplasmática em células em repouso e nuclear após ativação da via.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo, produzido contra um peptídeo da região N-terminal comum tanto ao p105 quanto ao p50, é esperado que detecte ambas as formas; em WB, são esperadas bandas de ~105 kDa (p105) e ~50 kDa (p50), dependendo do tipo celular e do estímulo.
• Para IHC-P e IF/ICC, as condições de recuperação de antígeno e os métodos de fixação podem exigir otimização; recomenda-se testar os padrões de coloração tanto citoplasmática quanto nuclear.
• Verifique a especificidade do anticorpo usando controles adequados, como knockdown mediado por siRNA ou linhas celulares knockout.
• Para aplicações em ELISA, confirme que o anticorpo reconhece as conformações de proteínas nativas na sua matriz de amostra.
• Ajuste as condições de bloqueio e diluição do anticorpo empiricamente para o seu sistema experimental.

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