mAb de coelho anti-NLRP3 - Q8R4B8

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do NLRP3

• O NLRP3, também conhecido como criopirina, é um membro da família NLRP (contendo os domínios NACHT, LRR e PYD) de sensores intracelulares que se reúne para formar o inflamassoma NLRP3. Nomes alternativos incluem NALP3, CIAS1, Pypaf1, Mmig1, entre outros.
• Como componente sensor, o NLRP3 detecta uma ampla variedade de sinais associados a patógenos e danos (por exemplo, ATP, nigericina, cristais e amiloide-β), desencadeando a formação do inflamassoma. Isso leva à ativação da caspase-1, que cliva a pró-IL-1β e a pró-IL-18 em suas formas ativas e induz a piroptose por meio da gasdermina-D. Referências relacionadas: PMID:19362020, PMID:23582325, PMID:26642356
• A ativação requer efluxo de K⁺ e frequentemente envolve a relocalização para a rede trans-Golgi ou para os sítios de contato entre o retículo endoplasmático e as mitocôndrias. A atividade ATPase do NLRP3 é necessária para a montagem do inflamassoma. Referências relacionadas: PMID:34861190
• O NLRP3 também atua de forma independente como fator de transcrição que promove a diferenciação Th2 ao se ligar ao promotor de IL-4 e regular a expressão de citocinas Th2, influenciando assim a asma alérgica e o crescimento tumoral. Referências relacionadas: PMID:26098997
• A localização subcelular é dinâmica: em condições de repouso, o NLRP3 está presente no citosol e no retículo endoplasmático; após a ativação, desloca-se para o centro organizador de microtúbulos e para o complexo de Golgi, sendo secretado. Também pode ser encontrado no núcleo.
• Alta expressão em leucócitos do sangue periférico, incluindo macrófagos e linfócitos Th2, consistente com seu papel na imunidade inata e adaptativa. Referências relacionadas: PMID:15302403, PMID:26098997
• As modificações pós-traducionais incluem fosforilação, palmitoilação e ubiquitinação, regulando sua atividade e estabilidade. Palavras-chave: Ativador, ligação ao ATP, inflamassoma, repetição rica em leucina, proteoma de referência, conjugação de Ubl.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• Este anticorpo foi produzido contra os aminoácidos 1–150 do NLRP3 de camundongo, sugerindo o reconhecimento do domínio PYD N-terminal. Pode detectar tanto as formas completas quanto as clivadas.
• Para Western blotting (proteína de 118 kDa), use um gel de SDS-PAGE de 6–8% e uma transferência prolongada (por exemplo, 2 horas a 100 V) para proteínas de alto peso molecular. Inclua um lisado de controle positivo de macrófagos de camundongo ou de células THP-1 tratadas com LPS e nigericina.
• Para imunofluorescência, permeabilize as células com Triton X-100 a 0,1% para acessar o NLRP3 citosólico e associado às organelas. Faça uma coloração dupla com marcadores de organelas para estudar a translocação dependente da ativação.
• Na imunoprecipitação, use 1–2 µg de anticorpo por 500 µg de lisado; a proteína pode exigir reticulação ou lise cuidadosa para manter os complexos do inflamassoma.
• Valide todas as aplicações com tecidos ou sistemas celulares apropriados de camundongo, pois a reatividade cruzada foi relatada apenas para camundongo.

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